重组变构型人TRAIL对肺癌细胞凋亡的诱导作用及其机制探讨

摘要：

目的:观察重组变构型人肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体(recombinant mutant human tumor necrosis factor-related apoptosis-inducing ligand,rmhTRAIL)对人肺癌A549细胞株的凋亡诱导作用,验证与此凋亡相关的差异蛋白质表达谱.方法:A549细胞经rmhTRAIL处理后,采用MTT法检测细胞增殖抑制率,FCM法检测细胞周期及细胞凋亡变化.采用液相色谱串联质谱(liquid chromatograph-tandem mass spectrometer,LC-MS/MS)鉴定技术对rmhTRAIL作用前后A549细胞的蛋白质组学进行对比分析,寻找差异表达明显的凋亡相关蛋白,然后用实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法验证相关基因的表达水平.结果:不同质量浓度的rmhTRAIL处理A549细胞24 h后,细胞增殖抑制率均显著提高(P值均＜ 0.05),半数抑制浓度为(9.5±3.9)×105 ng/mL.5×1o5 ng/mL rmhTRAIL处理24 h可诱导A549细胞凋亡,早期凋亡率明显升高(P＜0.01).rmhTRAIL对细胞周期无明显影响.rmhTRAIL作用后,A549细胞中肿瘤坏死因子受体超家族成员10B (tumor necrosis factor receptor superfamily member 10B,TNFRSF10B)和TNFRSF10D表达水平分别下调至21.3％和31.8％,细胞FLICE抑制蛋白(cellular FLICE-inhibitory protein,c-FLIP)表达水平上调至2.867倍.实时荧光定量PCR及蛋白质印迹法检测结果证实,用药后作为TNFRSF成员之一的小分子死亡受体5(death receptor-5,DR5)的mRNA和蛋白表达均明显下调(P值均＜ 0.05),而c-FLIP mRNA和蛋白表达则明显上调(P值均＜0.05).结论:rmhTRAIL可诱导A549细胞凋亡,其原因可能与DR5表达下调及c-FLIP表达上调有关.

关键词：癌、非小细胞肺、细胞凋亡、TNF相关凋亡诱导配体、受体、肿瘤坏死因子、细胞FLICE抑制蛋白、死亡受体5

所属期刊栏目：35

分类号：R734.2(肿瘤学)

在线出版日期：2015-08-31（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：774-781