AQP9过表达抑制肝癌SMMC-7721细胞裸鼠皮下移植瘤的生长及其作用机制的研究

摘要：

目的:观察水通道蛋白9 (aquaporin 9,AQP9)对人肝癌SMMC-7721细胞裸鼠皮下移植瘤生长的影响,并初步探讨其可能的机制.方法:将重组慢病毒LV-AQP9(以空载体LV-GFP作为阴性对照)导入SMMC-7721细胞中,构建SMMC-7721/LV-AQP9重组细胞.激光共聚焦显微镜下观察重组慢病毒LV-AQP9在SMMC-7721细胞中的感染效率,实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法检测AQP9 mRNA和蛋白在SMMC-7721细胞中表达的改变.采用FCM法和DAPI染色检测细胞的凋亡情况.CCK-8法检测SMMC-7721细胞增殖能力的变化.将重组肝癌SMMC-7721/LV-AQP9细胞和SMMC-7721/LV-GFP细胞分别接种于裸鼠皮下,观察2组小鼠中移植瘤生长的情况,并采用HE染色观察移植瘤及肺组织病理学的情况,免疫组织化学法检测移植瘤中增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)的表达水平.结果:激光共聚焦显微镜下观察发现,重组慢病毒LV-AQP9在SMMC-7721细胞中的感染效率为90％左右,且AQP9 mRNA以及蛋白在SMMC-7721细胞中的表达水平显著增加(P值均＜0.01).与空白对照组和阴性对照组(GFP组)相比,AQP9过表达组(AQP9组)细胞的总凋亡率显著增加(P＜0.01);而AQP9组细胞在48～96 h各时间点的细胞增殖能力均受到抑制(P值均＜ 0.05).重复测量方差分析比较2组移植瘤体积的结果提示,AQP9组移植瘤体积显著小于GFP组(F分组=79.161,P分组=0.000),AQP9组皮下移植瘤生长速度明显小于GFP组(F分组×时间=18.481,P分组×时间=0.002).AQP9组移植瘤中PCNA蛋白表达水平较GFP组下调.结论:AQP9过表达抑制人肝癌SMMC-7721细胞在裸鼠皮下生长,并可能通过促进凋亡及抑制增殖两种途径参与调控,为深入研究分子机制奠定基础,且有望成为肿瘤治疗的新靶点.

关键词：癌、肝细胞、水通道蛋白质9、小鼠、裸、细胞凋亡、细胞增殖

所属期刊栏目：35

分类号：R735.7(肿瘤学)

在线出版日期：2015-08-31（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：723-731