BRAＦV600E突变基因沉默可抑制甲状腺乳头状癌细胞增殖

摘要：

目的:通过RNA干扰技术使v-raf鼠类肉瘤滤过性病毒致癌基因同源体B1 (v-raf murine sarcoma viral oncogene homolog B1,BRAF)的突变基因BRAFV600E表达沉默,探讨该基因沉默在甲状腺乳头状癌细胞体外增殖中的作用.方法:将携带靶向BRAFV600E基因的短发夹RNA (short hairpin RNA,shRNA)的质粒载体(命名为BRAFV600E-shRNA)转染甲状腺乳头状癌CGTHW3细胞株,然后采用半定量RT-PCR和蛋白质印迹法检测BRAFV600E-shRNA转染对BRAFV600E突变基因表达的抑制作用,以及丝裂原细胞外激酶/细胞外信号调节激酶(mitogen extracellular linase/extracellular signal-regulated kinase,MEK/ERK)信号通路相关蛋白表达水平的变化;采用MTT法检测BRAFV600E突变基因沉默后甲状腺乳头状癌细胞体外增殖能力的变化;采用FCM法检测细胞周期分布的变化.结果:特异性BRAFV600E-shRNA转染可明显抑制甲状腺乳头状癌细胞中BRAFV600E突变基因的mRNA和蛋白表达,且使MEK/ERK信号通路中Ras、磷酸化MEK (phospho-MEK,p-MEK)和p-ERK蛋白的表达量明显减少(P值均＜ 0.05).与未转染的空白对照组相比,BRAFV600E-shRNA转染后72h时CGTHW3细胞的增殖活性明显降低(P＜0.05);转染组中G0/G1期细胞所占比例明显高于空白对照组,而S期细胞所占比例明显降低(P值均＜ 0.05).结论:BRAFV600E突变基因沉默可能通过阻断MEK/ERK信号通路,有效抑制甲状腺乳头状癌细胞的体外增殖.

关键词：甲状腺肿瘤、癌、乳头状、原癌基因蛋白质B-raf、RNA干扰、细胞增殖、细胞周期

所属期刊栏目：35

分类号：R736.1(肿瘤学)

在线出版日期：2015-04-28（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：276-282