雷帕霉素对骨肉瘤MG63细胞巢蛋白表达的调节及作用机制

摘要：

目的:探讨雷帕霉素(rapamycin,RAPA)对骨肉瘤MG63细胞中巢蛋白(nestin)表达的影响及可能的作用机制.方法:MTT法检测RAPA对MG63细胞增殖的影响,并采用反转录聚合酶链式反应(reverse transcription-polymerase chine reaction,RT-PCR)和蛋白质印迹法检测RAPA对nestin mRNA和蛋白表达的影响;分别采用细胞外信号调节激酶(extracellular signal-regulated kinase,ERK)抑制剂U0126、蛋白激酶B(protein kinase B,PKB,又称Akt)抑制剂wortmannin、糖原合成激酶-3β(glycogen synthase kinase-3β,GSK-3β)抑制剂氯化锂(lithium chloride,LiCl)或瞬时转染特异性针对GSK-3β的小干扰RNA (small interfering RNA,siRNA)以及蛋白激酶A(protein kinase A,PKA)抑制剂H89预处理MG63细胞,再用RAPA进行处理,蛋白质印迹法检测抑制ERK、Akt、GSK-3β以及PKA的活性对RAPA导致的nestin蛋白上调的影响;蛋白质印迹法检测RAPA处理后对Akt和GSK-3β活性”磷酸化Akt (phospho-Akt,p-Akt) /Akt和p-GSK-3β/GSK-3β的比值”的影响.结果:RAPA对细胞的相对增殖率无明显影响;RAPA (100 nmol/L)处理MG63细胞48 h后,nestin蛋白的表达水平明显提高,为对照组的1.93倍(P＜0.05); 24和48 h时,nestin mRNA的表达水平分别为对照组的1.89倍和1.84倍(P值均＜0.05).Wortmannin增强了RAPA导致的nestin表达升高,LiCl或GSK-3β-siRNA干扰GSK-3β表达抑制了RAPA导致的nestin表达升高,而U0126和H89则对nestin的表达无明显影响.p-Akt/Akt比值在RAPA处理24和48 h后分别下调21％和63％,而p-GSK-3β/GSK-3β比值则分别下调了26％和42％.结论:RAPA通过抑制Akt的活性和增强GSK-3β的活性上调了MG63细胞中nestin的表达.

关键词：骨肉瘤、雷帕霉素、巢蛋白、蛋白激酶B、糖原合成激酶-3β

所属期刊栏目：35

分类号：R738.1(肿瘤学)

在线出版日期：2015-04-28（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：268-275