沉默Cbl-b基因对增强T淋巴细胞杀伤小鼠乳腺癌细胞能力的影响

摘要：

目的:利用特异性针对Cbl-b (casitas B cell lymphoma-b)基因的小干扰RNA (small interfering RNA,siRNA)沉默小鼠T淋巴细胞中Cbl-b的表达,并观察沉默Cbl-b表达后T淋巴细胞对小鼠乳腺癌TM40D细胞体外免疫杀伤作用的影响.方法:筛选高效特异性沉默Cbl-b基因的siRNA序列,转染BALB/c小鼠脾脏T淋巴细胞;转染72 h后,利用酶联免疫吸附法(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测T淋巴细胞上清液中白细胞介素-2(interleukin-2,IL-2)和转化生长因子-β(transforming growth factor-β,TNF-β)等T淋巴细胞因子分泌的情况;CCK-8(cell counting kit-8)法检测Cbl-b基因沉默的T淋巴细胞对小鼠乳腺癌TM40D细胞的杀伤率.结果:从小鼠脾脏中分离获得的T淋巴细胞的纯度为94.77％.蛋白质印迹法检测结果显示,Cbl-b-siRNA-1抑制Cbl-b蛋白表达的能力最佳;Cbl-b-siRNA-1转染T淋巴细胞72h后,转染组、阴性对照组和空白对照组T淋巴细胞培养上清液中IL-2的分泌水平分别为(1 678.96±126.91) pg/mL、(1 141.69±83.67) pg/mL和(1 054.03±85.14) pg/mL,转染组中IL-2的分泌水平明显高于阴性对照组和空白对照组(P值均＜ 0.001);TNF-β的分泌水平分别为(769.33±65.46) pg/mL、(573.33±58.67) pg/mL和(581.72±51.72)pg/mL,转染组中TNF-β的分泌水平明显高于阴性对照组和空白对照组(P值均＜ 0.05).在体外实验中,与空白对照组及阴性对照组相比,转染组T淋巴细胞能更高效地杀伤TM40D细胞,对肿瘤细胞的杀伤率最高为(59.18±3.82)％.结论:特异性沉默Cb1-b基因的表达能够促进T淋巴细胞分泌细胞因子IL-2和TNF-β的能力,并增强T淋巴细胞对小鼠乳腺癌TM40D细胞的免疫杀伤作用.

关键词：乳腺肿瘤、T淋巴细胞、RNA、小分子干扰、免疫疗法、Cbl-b基因

所属期刊栏目：35

分类号：R737.9(肿瘤学)

在线出版日期：2015-04-28（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：253-259,267