肾母细胞瘤过表达基因对人骨肉瘤143B细胞增殖、凋亡和迁移的影响

摘要：

目的:探讨肾母细胞瘤过表达(nephroblastoma overexpressed,NOV)基因对人骨肉瘤细胞143B增殖、凋亡和迁移的影响及其可能的作用机制.方法:分别采用半定量反转录聚合酶链反应(reverse transcriptionpolymerase chain reaction,RT-PCR)和蛋白质印迹法筛选NOV低表达的骨肉瘤细胞株.将重组腺病毒AdNOV和AdGFP(空载体阴性对照组)分别感染骨肉瘤143B细胞,培养24 h后,在荧光显微镜下观察重组腺病毒AdNOV和AdGFP在143B细胞中的感染效率,并通过半定量RT-PCR和蛋白质印迹法检测NOV mRNA和蛋白在143B细胞中的表达情况.分别采用MTT法、FCM法和Transwell小室法检测NOV过表达对143B细胞增殖、凋亡及迁移的影响;半定量RT-PCR法及蛋白质印迹法检测NOV过表达的143B细胞中NOV、抗凋亡因子B细胞淋巴瘤基因-2(B celllymphoma-2,Bcl-2)和Bcl-2相关X蛋白(Bcl-2-associated X protein,Bax)表达水平的变化以及磷酸化p38 (phospho-p38,p-p38)、总p38、磷酸化c-Jun氨基末端激酶(phospho-c-Jun N-terminal kinase,p-JNK)和总JNK表达水平的变化.结果:NOV在骨肉瘤细胞143B中的表达水平最低(P＜0.05).荧光显微镜下观察发现,重组腺病毒AdNOV在143B细胞中的感染效率约为60％;NOV在143B细胞中成功过表达(P＜0.05).NOV过表达可抑制143B细胞的增殖(P＜0.05),将细胞周期阻滞于G0/G1期(P＜0.05),促进了143B细胞的凋亡(P＜0.001);并可提高143B细胞的迁移能力(P＜0.001).NOV过表达后,143B细胞中促凋亡因子Bax表达上调(P＜0.001),抑制凋亡因子Bcl-2表达下降(P＜0.05);同时,p-p38与p-JNK表达水平均显著上调(P＜0.001).结论:腺病毒介导的NOV过表达抑制了骨肉瘤143B细胞的增殖,促进了其凋亡和迁移,其作用机制可能与p38/丝裂原活化蛋白激酶(mitogenactivated protein kinase,MAPK)和JNK/MAPK信号通路的激活有关.

关键词：骨肉瘤、基因、肾母细胞瘤、细胞增殖、细胞凋亡、肿瘤转移

所属期刊栏目：35

分类号：R738.1(肿瘤学)

资助基金：National Natural Science Foundation of China No.81102035国家自然科学基金资助项目编号:81102035

在线出版日期：2015-03-31（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：119-128