特异性靶向卵巢癌COC1细胞的Puma基因表达系统的建立

摘要：

目的:建立人端粒酶反转录酶(human telomerase reverse transcriptase,hTERT)基因启动子介导的p53正向凋亡调控因子(p53 up-regulated modulator of apoptosis,Puma)基因腺病毒表达载体,实现Puma基因在卵巢癌细胞中的定向表达.方法:采用RT-PCR的方法扩增Puma基因开放阅读框全长以及hTERT启动子区,并克隆至腺病毒穿梭表达载体pDC316中;将重组载体包装为腺病毒颗粒,进而感染正常卵巢上皮细胞HUM-CELL-0088以及卵巢癌COC1细胞;分别采用实时荧光定量PCR及蛋白质印迹法检测Puma mRNA及蛋白的表达情况;CCK-8(cell counting kit-8)法及FCM法检测Puma表达对COC1细胞增殖及凋亡的影响.结果:成功构建了hTERT启动子介导的Puma基因重组腺病毒表达载体pDC316-hTERT-Puma.表达载体pDC316-hTERT-Puma能够介导Puma基因在卵巢癌COC1细胞中特异性高表达,而在正常卵巢上皮细胞中低表达;Puma基因成功表达后,COC1细胞的增殖被抑制(P＜0.05),凋亡率明显增加(P＜0.05).结论:成功构建了hTERT启动子介导的Puma基因腺病毒表达载体,实现了Puma基因在卵巢癌细胞中的定向表达,为进一步实现Puma在卵巢癌中的靶向治疗奠定了基础.

关键词：卵巢肿瘤、肿瘤抑制蛋白质p53、人端粒酶反转录酶、腺病毒科感染

所属期刊栏目：34

分类号：R737.31(肿瘤学)

资助基金：1.重庆市卫生局面上资助项目编号:2011-2-3662.重庆市卫生局面上资助项目编号:2013-2-121

在线出版日期：2014-09-11（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：679-684