PIBSPA对人黑素瘤细胞迁移和侵袭能力的影响

摘要：

目的:探讨磷脂酰肌醇4,5-二磷酸5磷酸酶A(phosphatidylinositol 4,5-bisphosphate 5-phosphatase A,PIB5PA)对人黑素瘤Mel-FH细胞迁移和侵袭能力的影响.方法:构建携带4-羟基三苯氧胺(4-hydroxytamoxifen,4-OHT)可调控基因表达系统的重组真核表达载体pF-5xUAS-SV40-PIB5PA,并将其感染人黑素瘤Mel-FH细胞,经嘌呤霉素和潮霉素B的双重筛选,成功获得稳定感染的Mel-FH.PIB5PA亚克隆细胞.应用蛋白质印迹法检测4-OHT诱导Mel-FH.HB5PA细胞表达PIB5PA蛋白的最佳浓度和最适时间,应用细胞划痕实验和Transwell小室法检测Mel-FH.PIB5PA细胞的迁移和侵袭能力,蛋白质印迹法检测Mel-FH.PIB5PA细胞中磷酸化蛋白激酶B(phospho-protein kinase B,p-PKB,又称p-AKT)、磷酸化黏着斑激酶(phospho-focal adhesion kinase,p-FAK)、基质金属蛋白酶-2(matrix metalloproteinase-2,MMP-2)、MMP-9、组织金属蛋白酶抑制剂-1(tissue inhibitor of matrix metalloproteinase-1,TIMP-1)和TIMP-2蛋白的表达.结果:10 nmol/L 4-OHT处理黑素瘤Mel-FH.PIB5PA细胞16h后可稳定诱导PIB5PA蛋白过表达.与未经4-OHT处理的Mel-FH.PIB5PA细胞比较,诱导PIB5PA过表达能显著抑制Mel-FH.PIB5PA细胞的迁移和侵袭能力(P＜0.05),并下调p-AKT、p-FAK、MMP-2、MMP-9、TIMP-1、TIMP-2、MMP-2/TIMP-2和MMP-9/TIMP-1蛋白的表达水平(P＜0.05).结论:外源性过表达PIB5PA可明显抑制人黑素瘤Mel-FH细胞的体外迁移和侵袭能力,其机制可能与蛋白激酶AKT和FAK的活性下调,从而下调MMP-2/TIMP-2和MMP-9/TIMP-1的相对表达水平有关.

关键词：黑素瘤、细胞迁移分析、肿瘤浸润、蛋白激酶类、基质金属蛋白酶类、PIB5PA

所属期刊栏目：34

分类号：R739.5(肿瘤学)

在线出版日期：2014-07-31（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：487-493