Hedgehog信号通路在TGF-β1诱导肺腺癌A549细胞上皮-间质转化中的作用

摘要：

目的:探讨阻断Hedgehog信号通路对转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)诱导的人肺腺癌A549细胞上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)的影响.方法:采用TGF-β1(5 ng/mL)处理A549细胞后,通过对细胞形态的观察、EMT标志蛋白上皮细胞钙黏蛋白(E-cadherin)和波形蛋白(vimentin)表达的检测及细胞划痕实验,观察TGF-β1对A549细胞发生EMT的影响;实时荧光定量-PCR和蛋白质印迹法检测对Gli1 mRNA及其蛋白表达水平的影响.然后,分别采用Hedgehog信号通路特异性阻断剂cyclopamine和GANT61特异性阻断A549细胞中的Hedgehog信号通路,再用TGF-β1(5 ng/mL)处理A549细胞,实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法检测Gli1 mRNA及其蛋白表达水平的改变,蛋白质印迹法和细胞免疫荧光检测EMT相关蛋白E-cadherin和vimentin表达的变化,Transwell小室侵袭法检测对A549细胞侵袭能力的影响.结果:TGF-β1能够诱导A549细胞发生EMT,并使Hedgehog信号通路下游的信号转导因子Gii1 mRNA (P=0.031)及蛋白(P=0.035)的表达水平明显上调.采用cyclopamine和GANT61特异性地阻断A549细胞中的Hedgehog信号通路后,cyclopamine组及GANT61组中vimentin蛋白表达水平与未阻断组相比明显下调,其中以GANT61组最为显著(P=0.001);而上皮细胞标志蛋白E-cadherin表达明显上调,仍以GANT61组最为显著(P=0.000):Transwell小室侵袭实验检测结果显示,cyclopamine和GANT61均能降低A549细胞的侵袭能力,与TGF-β1单药组相比,差异均有统计学意义(P=0.000).结论:Hedgehog特异性阻断剂GANT61和cyclopamine可以减少TGF-β1诱导的A549细胞EMT,提示Hedgehog信号转导通路在A549细胞EMT中起重要作用.

关键词：肺肿瘤、转化生长因子β1、Hedgehog信号转导通路、上皮间质转化

所属期刊栏目：34

分类号：R734.2(肿瘤学)

在线出版日期：2014-06-19（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：397-403