H2O2对肺腺癌A549细胞葡萄糖和谷氨酰胺代谢的影响

摘要：

目的:探讨H2O2对肺腺癌A549细胞中葡萄糖和谷氨酰胺代谢途径依赖性的改变及可能的作用机制.方法:用不同浓度的H2O2处理A549细胞后,细胞计数试剂盒-8(cell counting kit-8,CCK-8)法检测细胞的存活率;荧光探针氯甲基-2',7'-二氯二氢荧光素二乙酯[5-(and-6)-chloromethyl-2',7'-dichlorofluorescein diacetate,acetyl ester,CM-H2DCFDA]染色法检测细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)的水平;葡萄糖和乳酸测定试剂盒分别检测细胞中葡萄糖的摄取量和乳酸的产生量;CCK-8法检测葡萄糖代谢抑制剂2-脱氧-D-葡萄糖(2-deoxy-D-glucose,2-DG)对A549及H2O2处理过的A549细胞增殖的影响及谷氨酰胺对A549及H2O2处理过的A549细胞增殖的影响.实时荧光定量-PCR检测葡萄糖代谢通路和谷氨酰胺代谢通路上相关基因mRNA表达的变化;蛋白质印迹法检测不同浓度H2O2处理后对A549细胞中异柠檬酸脱氢酶1(isocitrate dehydrogenase1,IDH1)和IDH2蛋白表达的影响.结果:低毒性浓度H2O2(50和100 μmol/L)作用2h后,A549细胞的存活率未受明显影响,但细胞ROS水平增高,葡萄糖消耗增加,乳酸生成增高;葡萄糖代谢抑制剂2-DG对H2O2预处理后的A549细胞的增殖具有抑制作用,低浓度谷氨酰胺对H2O2预处理后的A549细胞有上调生存率的作用.与葡萄糖代谢通路相关基因mRNA的表达被上调,与谷氨酰胺代谢通路相关基因mRNA表达被下调,IDH1和IDH2蛋白的表达水平被下调.结论:H2O2可上调A549细胞对葡萄糖代谢通路的依赖性,而下调对谷氨酰胺代谢通路的依赖性,其作用机制可能与IDH1和IDH2蛋白表达的下调有关.

关键词：肺肿瘤、活性氧、葡萄糖、谷氨酰胺、抗代谢药,抗肿瘤

所属期刊栏目：34

分类号：R734.2(肿瘤学)

资助基金：1.国家自然科学基金资助项目81071180;2.“973”重大专项资助项目2012CB932604;3.重大新药创制资助项目2012ZX09506-001-005

在线出版日期：2014-05-28（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：324-330