AHR小干扰RNA对肝癌HCCLM3细胞体外增殖和体内肿瘤生长的影响

摘要：

目的:探讨RNA干扰(RNA interference,RNAi)芳香烃受体(aryl hydrocarbon receptor,AHR)基因表达对肝癌HCCLM3细胞增殖和迁移的影响及其可能的作用机制.方法:将AHR基因特异性小干扰RNA(small interference RNA,siRNA)转染人肝癌HCCLM3细胞后,应用实时荧光定量-PCR法检测AHR mRNA的表达水平,蛋白质印迹法检测AHR和应激激活的蛋白激酶(stress-activated protein kinase,SAPK) /c-Jun N-末端激酶(c-Jun N-terminal kinase,JNK)、细胞外信号调节激酶1/2 (extracellular signal-regulated kinase 1/2,ERK 1/2)和c-Jun 蛋白及其磷酸化水平,CCK-8(cell counting kit-8)法和Transwell法检测AHR-siRNA转染后对HCCLM3细胞增殖和迁移能力的影响.合成AHR基因特异性小发夹RNA (small hairpin RNA,sh RNA),构建稳定干扰AHR基因表达的重组病毒载体pMKO.1/puro-shAHR,并将其感染HCCLM3细胞,感染后的细胞接种于裸鼠皮下建立移植瘤模型,观察移植瘤的生长情况;蛋白质印迹法检测pMKO.1/puro-shAHR感染后HCCLM3细胞及裸鼠皮下移植瘤组织中AHR蛋白的表达水平.结果:AHR-siRNA转染组HCCLM3细胞中AHR mRNA和蛋白的表达水平明显下降(P＜0.01),细胞的增殖和迁移能力受到抑制(P＜0.01); SAPK/JNK、ERK 1/2和c-Jun 的磷酸化水平降低(P＜0.01).pMKO.1/puro-shAHR感染后的HCCLM3细胞裸鼠皮下移植瘤体积和质量明显低于对照组(pMKO.1/puro-shNC感染HCCLM3细胞)(P＜0.01),pMKO.1/puro-shAHR感染后的HCCLM3 细胞及裸鼠皮下移植瘤组织中AHR蛋白的表达水平降低(P＜0.01).结论:AHR可能通过上调SAPK/JNK、ERK 1/2和c-Jun的磷酸化水平而促进HCCLM3细胞的体外增殖和迁移.

关键词：肝肿瘤、细胞增殖、细胞迁移分析、丝裂原活化蛋白激酶、基因,AHR、细胞,HCCLM3

所属期刊栏目：34

分类号：R735.7(肿瘤学)

在线出版日期：2014-05-04（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共8页

页码：223-230