肺癌细胞条件培养液活化Notch通路促进破骨细胞分化

摘要：

目的:体外检测肺腺癌A549细胞条件培养液(conditioned medium,CM)对人外周血CD14+单核细胞破骨分化和增殖的影响,探讨Notch通路相关因子在其中所起的作用.方法:用含巨噬细胞集落刺激因子(macrophage colony stimulating factor,M-CSF)的α-MEM细胞培养液培养健康成人外周血CD14+单核细胞,作为对照组;用M-CSF和人肺腺癌A549细胞CM培养人外周血CD14+单核细胞,作为A549 CM组;用M-CSF、A549细胞CM和γ-分泌酶抑制剂3,5-二氟苯乙酰-L-丙氨酰-S-苯基甘氨酸t-丁酯[N-[N-(3,5-difluorophenacetyl)-L-alanyl]-S-phenylglycine t-butyl ester,DAPT}培养人外周血CD14+单核细胞,作为DAPT组.各组均在培养6d后加入核因子κB受体活化因子配体(receptor activator for nuclear factor-1cB ligand,RANKL)继续培养.实时荧光定量-PCR法检测破骨细胞标志基因抗酒石酸酸性磷酸酶(tartrate-resistant acid phosphatase,TRAP)、组织蛋白酶K(cathepsin K,CK)、降钙素受体(calcitonin receptor,CTR)及Notch靶基因HES-1、HEY-1的mRNA表达;TRAP染色法检测破骨细胞形成;扫描电子显微镜下观察破骨细胞溶骨功能;免疫荧光法检测Notch活性片段NICD的表达情况;CCK-8法检测CD14+单核细胞增殖情况.结果:A549 CM 组TRAP、CK和CTR表达水平以及TRAP+多核细胞数、溶骨面积和细胞核内Notch活性片段NICD的荧光强度均较对照组明显上调(P＜0.05),而DAPT组较A549 CM组明显下调,但仍高于对照组(P＜0.05); A549CM组HES-1和HEY-1 mRNA的表达水平明显高于DAPT组和对照组(P＜0.05),后2者无明显差异;A549CM组细胞增殖率高于对照组,而DAPT组的细胞增殖率最高.结论:肺腺癌A549 CM可能通过活化Notch通路,促进CD14+单核细胞向破骨细胞分化;同时Notch通路活化可抑制CD14+单核细胞增殖.

关键词：肺肿瘤、破骨细胞、受体,Notch、细胞分化、细胞增殖

所属期刊栏目：34

分类号：R734.2;R730.6(肿瘤学)

资助基金：国家自然科学基金资助面上项目81271979

在线出版日期：2014-05-04（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：216-222