靶向HOXA9基因RNAi慢病毒载体增加人急性单核细胞白血病U937细胞的药物敏感性

摘要：

目的:探讨慢病毒载体介导的短发夹RNA (short hairpin RNA,shRNA)沉默同源盒A9 (homeobox A9,HOXA9)基因对人急性单核细胞白血病U937细胞药物敏感性的影响.方法:应用蛋白质印迹法从4条针对HOXA9基因的RNA干扰(RNA interference,RNAi)慢病毒载体中筛选出1条敲减效率最高的包装成慢病毒HOXA9/GV118RNAi-LV#2.实验分成未感染对照组(control,CON)、阴性对照组(negative control,NC)及敲减组(knock down,KD).HOXA9/GV118RNAi-LV#2感染U937细胞后,应用实时荧光定量PCR法检测HOXA9 mRNA的沉默效率,蛋白质印迹法检测HOXA9蛋白的表达,MTT法和FCM检测病毒感染前后U937细胞对长春新碱(vincristine,VCR)和柔红霉素(daunorubicin,DNR)的敏感性及细胞凋亡率变化,RT-PCR法检测DNR作用后各组细胞中MDR-1 mRNA的表达.结果:KD组细胞中HOXA9 mRNA的沉默效率在55％以上,HOXA9蛋白的表达量明显减少.VCR及DNR作用KD组细胞的半数抑制浓度(half inhibitory concentration,IC50)值明显降低(P＜0.01),药物敏感性明显增强；VCR和DNR作用后,KD组细胞的凋亡率明显增加(P＜ 0.01)； DNR作用后,KD组U937细胞中MDR-1 mRNA的表达水平明显下调(P＜0.01).结论:靶向HOXA9基因的RNAi慢病毒可稳定沉默HOXA9基因的表达,在一定程度上提高U937细胞对化疗药物的敏感性.

关键词：白血病、慢病毒、RNA干扰、抗药性、肿瘤、基因、HOXA9、细胞、U937

所属期刊栏目：33

分类号：R733.7(肿瘤学)

资助基金：山东省科学技术发展计划项目2010GSF10264

在线出版日期：2013-03-26（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：21-27