腺瘤性结肠息肉病基因甲基化在肝细胞癌分子诊断中的价值

摘要：

目的:建立甲基化敏感性限制性内切酶-定量PCR (methylation-sensitive restriction enzyme-quantitative PCR,MSRE-qPCR)方法,并应用该方法探讨血浆腺瘤性结肠息肉病(adenomatous polyposis coli,APC)基因甲基化检测在肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)诊断中的应用价值.方法:用Hha Ⅰ消化DNA样品,qPCR 技术评估酶切效率,建立优化的MSRE-qPCR方法.用MSRE-qPCR法检测45例肝组织(20例HCC及其相应匹配的非癌组织和5例正常肝组织)中APC甲基化水平；应用亚硫酸氢盐测序PCR(bisulfite sequencing PCR,BSP)对MSRE-qPCR检测结果进行验证,并与甲基化特异性PCR (methylation-specific PCR,MSP)检测方法比较.运用MSRE-qPCR技术检测72例HCC、37例肝良性病变和41例健康志愿者血浆标本的APC甲基化状态.结果:建立的MSRE-qPCR方法可定量检测低至1％的APC甲基化片段.MSRE-qPCR和MSP检测结果均显示,HCC组织中APC基因发生高频率甲基化.MSRE-qPCR检测结果经BSP验证准确无误,且与MSP检测结果具有较好的一致性(Kappa=0.955,P＜0.000 1).HCC患者血浆APC甲基化水平高于肝良性病变及健康志愿者(P＜0.000 1).血浆APC甲基化分析与血清甲胎蛋白(alpha-fetoprotein,AFP)联合检测可提高HCC诊断效率.结论:MSRE-qPCR可定量检测APC甲基化水平.血浆APC甲基化分析对于HCC的非侵入性诊断具有重要价值.

关键词：癌、肝细胞、DNA甲基化、血浆、分子诊断技术、聚合酶链反应、限制性内切酶、基因、腺瘤性结肠息肉病

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分类号：R735.7(肿瘤学)

资助基金：江苏省自然科学基金资助项目BK2008114

在线出版日期：2012-01-18（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：924-929