外源性人多药耐药基因转染对兔骨髓单个核细胞生物学行为的影响

摘要：

目的:观察外源性人多药耐药基因(human multidrug resistance gene 1, hMDR1)对新西兰兔骨髓单个核细胞(mononuclear cells, MNCs)生物学行为的影响.方法:用携带目的基因hMDR1和绿色荧光蛋白(green fluorescence protein, GFP)报告基因的复制缺陷型重组腺病毒(rAd-hMDR1-GFP)转染原代培养的MNCs以获取hMDR1基因修饰的MNCs (MNCs-rAd-hMDR1-GFP),荧光显微镜和FCM法检测转染效率;MTT法绘制MNCs-rAd-hMDR1-GFP细胞生长曲线;FCM检测MNCs-rAd-hMDR1-GFP细胞周期及细胞凋亡情况;RT-PCR及Western印迹法从基因和蛋白水平检测MNCs-rAd-hMDR1-GFP细胞内hMDR1的表达;柔红霉素(daunorubicin, DNR)泵出实验检测导入hMDR1基因的外排泵生理功能.结果:感染复数(multiplicity of infection, MOI)为100时,rAd-hMDR1-GFP对MNCs的转染效率为30%～35%,且不影响MNCs增殖生长;FCM结果提示,rAd-hMDR1-GFP对MNCs细胞周期及凋亡无影响(P＞0.05);rAd-hMDR1-GFP转染72 h后hMDR1转录水平和P-糖蛋白(P-glycoprotein, P-gp)表达水平均明显升高(P＜0.01),且外源性hMDR1能发挥外排泵功能(P＜0.01).结论:rAd-hMDR1-GFP能将外源性hMDR1基因高效导入兔骨髓MNCs并稳定功能性表达,不影响MNCs细胞周期、细胞凋亡及细胞增殖生长等生物学特性,为进一步研究hMDR1基因的骨髓保护作用提供实验依据.

关键词：肿瘤治疗方案、基因、MDR、骨髓、单核细胞、复制缺陷型重组腺病毒、兔

所属期刊栏目：30

分类号：R73-36(肿瘤学)

资助基金：国家自然科学基金资助重点项目30330590

在线出版日期：2010-10-11（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：639-645