超声靶向微泡破裂法介导RNA干扰沉默survivin基因对宫颈癌HeLa细胞凋亡的影响

摘要：

目的:通过超声靶向微泡破裂(ultrasound targeted microbubble destruction ,UTMD)法介导基因转染,观察RNA干扰对宫颈癌HeLa细胞survivin基因的沉默效应和诱导细胞凋亡的作用.方法:构建靶向survivin基因的短发夹状RNA(short hairpin RNA,shRNA)表达质粒,将其和微泡共同处理后加入HeLa细胞并予以超声辐照,以空白细胞、单纯质粒、单纯超声辐照、质粒+超声辐照和质粒+Lipofectamine转染作为对照;采用荧光显微镜和FCM法评估基因转染效率,同时对超声辐照参数进行优化;应用FCM法和Hoechst染色及DNA ladder分析法检测细胞凋亡,应用RT-PCR检测survivin mRNA水平的变化.结果:经酶切鉴定及测序分析证实重组质粒构建成功.HeLa细胞采用UTMD处理后,基因转染率显著增加(P＜0.01),并在超声强度为1.0 W/cm2、辐照3 min的条件下最为显著(P＜0.01).PT-PCR检测结果显示,质粒与微泡共同作用加超声辐照组的survivin mRNA抑制率为(83.33±2.73)%,均显著高于各对照组(P＜0.01);FCM法检测结果显示,该组细胞的凋亡率同样显著高于各对照组(P＜0.01);Hoechst染色及DNA ladder检测结果显示,只有经脂质体或UTMD转染处理后的细胞中可检测到明显的细胞凋亡形态及凋亡梯带,其余各组均未检测到明显凋亡.结论:UTMD可有效增强表达质粒的转染效率,是一种新的、有应用前景的非病毒基因转移体系.UTMD介导RNA干扰沉默survivin基因可诱导明显的细胞凋亡,为肿瘤基因治疗及研究提供了新的方法.

关键词：宫颈肿瘤、RNA、小分子干扰、实验室技术和方法、基因、suvvivin

所属期刊栏目：29

分类号：R737-33(肿瘤学)

在线出版日期：2009-08-26（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：626-630