核心蛋白聚糖真核表达载体的构建及其表达

摘要：

目的:构建人核心蛋白聚糖(decorin,DCN)真核表达载体,并在人结直肠癌HCT-8细胞中进行表达,以研究其抗肿瘤作用.方法:以克隆有完整人DCN基因片段的质粒pBluescript为模板,采用聚合酶链式反应(PCR)扩增获得目的基因片段.真核表达载体pcDNA3及PCR产物经Xba Ⅰ和EcoR Ⅰ双酶切后连接,转化大肠杆菌JM109,获得重组载体pcDNA-DEC,进行酶切鉴定和测序鉴定.脂质体lipofectamine介导重组载体转染HCT-8细胞,经G418(800 μg/mL)筛选建立稳定转染细胞株.采用免疫组化法检测转染后HCT-8细胞中DCN的表达.MTT法检测HCT-8细胞的增殖活力.结果:PCR扩增获得与预期大小一致、约1000 bp的特异性DNA片段;重组载体pcDNA-DEC经双酶切鉴定及测序证实,人DCN基因cDNA片段正确插入真核表达载体中.免疫组化结果显示在稳定转染的HCT-8细胞株中可见DCN蛋白表达.细胞生长曲线显示转染DCN的HCT-8细胞生长较对照组减慢.结论:成功构建DCN真核表达载体pcDNA-DEC,并获得稳定转染的HCT-8细胞株,为进一步研究DCN抗肿瘤作用奠定基础.

关键词：基因扩增、基因、Decorin、转染、HCT-8细胞

所属期刊栏目：27

分类号：Q784(基因工程（遗传工程）)

资助基金：吉林省科技厅科技发展计划20061550

在线出版日期：2007-07-02（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：345-347,360