人甲胎蛋白基因启动子siRNA表达载体的构建及效应鉴定

摘要：

目的:探索基于人甲胎蛋白基因启动子构建的siRNA表达载体介导目的基因RNA干扰的可行性,为实现肝癌细胞靶向RNAi治疗作一初步研究.方法:PCR法扩增获得人甲胎蛋白基因启动子并插入pSilencer1.0-U6中以置换其U6启动子;依据hLRH-1基因RNAi靶位点设计出siRNA模板DNA,体外合成相应寡核苷酸片段后经退火形成短双链,再克隆构建成靶向人hLRH-1基因siRNA表达载体;脂质体转染法将上述重组质粒转入HepG2细胞中,实时定量PCR法初步分析所建系统在AFP表达细胞中触发靶基因hLRH-1的RNAi效应,以及hLRH-1调控下游靶基因的表达改变.结果:获得人甲胎蛋白基因启动子驱动的siRNA表达载体pSiAFP.所建的RNAi载体系统可在表达AFP的HepG2细胞中有效诱导靶基因hLRH-1表达下调,抑制率约达85%;同时调控hLRH-1下游靶基因CyclinE 1与Oct4的表达相应下调.结论:人甲胎蛋白基因启动子驱动的siRNA表达载体可在表达AFP的HepG2细胞中有效介导靶基因的RNAi效应.

关键词：肝肿瘤、实验性、甲胎蛋白类、RNA干扰、调控序列、核酸、HepG2细胞

所属期刊栏目：27

分类号：R735.7;R73-36+2(肿瘤学)

资助基金：福建省青年科技人才创新基金2004J067

在线出版日期：2007-05-09（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：190-193