RNA干扰技术抑制smad4基因表达对宫颈癌细胞增殖的影响

摘要：

目的:探讨用RNA干扰技术下调smad4基因表达对宫颈癌细胞增殖的影响.方法:用DNA重组技术将针对人smad4基因不同部位所设计的三对短发夹状RNA(short hairpin RNA,shRNA)序列克隆到真核表达质粒pGenesil-1中,构建smad4 shRNA表达载体pGenesil-smad4-shRNA1、2、3.脂质体介导转染人宫颈癌细胞株HeLa,经G418筛选抑制smad4表达的稳定细胞克隆.MTT法、克隆形成实验、流式细胞术检测抑制smad4基因对宫颈癌细胞增殖的影响.结果:成功构建分别携带三段shRNA及空载体对照的重组质粒pGenesil-smad4-shRNA1、2、3和pGenesil-con,三种shRNA重组质粒中pGenesil-smad4-shRNA2可明显降低细胞内smad4 mRNA及smad4蛋白表达,筛选出的HeLa/shRNA2细胞增殖能力明显增强.结论:应用RNA干扰技术能筛选出特异而高效阻断smad4基因表达及功能的shRNA,smad4基因表达下调能明显促进宫颈癌细胞生长.

关键词：宫颈肿瘤、RNA干扰、基因表达调控、基因、smad 4

所属期刊栏目：27

分类号：R737.33(肿瘤学)

资助基金：国家自然科学基金30371657;国家重点基础研究发展计划973计划2002CB513107

在线出版日期：2007-05-09（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：167-171