抗膜联蛋白Ⅰ单克隆抗体的制备及鉴定

摘要：

目的:制备抗膜联蛋白Ⅰ单克隆抗体(mAb),对其进行特性鉴定,为在恶性肿瘤诊断和治疗中的应用打下基础.方法:构建膜联蛋白Ⅰ基因480 bp的原核表达载体pQE30 ANX Ⅰ,异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导蛋白表达,并用Ni NTA树脂亲和层析柱纯化蛋白.用纯化的膜联蛋白Ⅰ作为抗原免疫BAIB/c小鼠,取免疫小鼠的脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,经过HAT、HT选择培养及有限稀释法进行克隆化,制备抗膜联蛋白I蛋白的单克隆抗体,用ELISA、Western blot及免疫组织化学染色法进行特性鉴定.结果:获得5株分泌抗膜联蛋白Ⅰ mAb的杂交瘤细胞,分别命名为1A8、1D2、1E2、4E7和5G3,所产抗体,均为IgGl亚型,轻链均为κ链,亲和力为(2.3～3.03)×108L/mol.经Western blot证实获得的mAbs可以特异性识别膜联蛋白Ⅰ抗原;免疫组织化学染色结果也显示这些mAbs可以特异识别肿瘤组织中的膜联蛋白Ⅰ.结论:成功地获得了5株抗膜联蛋白I的mAbs,为进一步在肿瘤诊断和治疗中应用膜联蛋白Ⅰ抗体打下了基础.

关键词：钙磷脂结合蛋白类、杂交瘤、抗体、单克隆

所属期刊栏目：26

分类号：R730.51(肿瘤学)

资助基金：上海市科委资助项目04DZ19108

在线出版日期：2006-12-25（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：979-983