短发夹RNA抑制喉癌细胞hTERT基因表达及诱导细胞凋亡

摘要：

目的:探讨DNA载体途径的RNA干扰技术抑制人端粒酶逆转录酶(hTERT)基因表达及诱导喉癌细胞Hep-2凋亡的作用.方法:构建靶向hTERT mRNA的质粒pshRNA1、pshRNA2及对照质粒pshRNA3、pEGFP,并将其分别转染喉鳞癌Hep-2细胞.共聚焦荧光显微镜观察质粒转染及表达情况;RT-PCR测定hTERT mRNA表达;Western印迹测定hTERT蛋白表达;末端重复片断扩增-酶联免疫吸附(TRAP-ELISA)方法测定细胞端粒酶活性;MTT法研究细胞增殖活性变化;原位细胞凋亡(TUNEL)及透射电子显微镜研究细胞凋亡.结果:①共聚焦荧光显微镜下见大量的细胞呈现绿色荧光,与其他组比较,pshRNA1、2组呈现荧光的死亡细胞显著增加.②pshRNA1、2转染细胞后hTERT mRNA及hTERT蛋白表达显著降低;其端粒酶活性明显受到抑制:转染后2 d pshRNA1组活性为:0.159±0.039、pshRNA2组活性为0.163±0.028,与空白对照组1.523±0.076比较,差异有非常显著性(P＜0.005).③pshRNA1、2转染细胞后可显著抑制细胞增殖、诱导细胞凋亡.这两组细胞透射电镜可见典型细胞凋亡特征.结论:DNA载体途径的RNA干扰技术能有效抑制hTERT基因的表达及端粒酶活性并诱导癌细胞凋亡,此法可能成为抑制肿瘤细胞的新途径.

关键词：喉肿瘤、端粒末端转移酶、RNA干扰、细胞凋亡、Hep-2细胞、端粒酶逆转录酶

所属期刊栏目：26

分类号：R739.65;R73-36+2(肿瘤学)

资助基金：国家自然科学基金30471873

在线出版日期：2006-11-07（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：798-804