小细胞肺癌抗独特型单链抗体的表达及活性研究

摘要：

目的:在大肠杆菌中高效表达小细胞肺癌(SCLC)抗独特型抗体3F6单链抗体(ScFv),并获得具有生物学活性的ScFv.方法:从SCLC抗独特型抗体3F6小鼠杂交瘤细胞中提取总RNA,反转录为cDNA.利用小鼠抗体骨架区共用引物,PCR扩增单抗重链可变区(VH)和轻链可变区(VL).通过人工设计的柔性连接肽(Gly4Ser)3连接构建3F6 ScFv.再将其重组到原核表达载体pQE31中,构建3F6 ScFv表达载体.转化大肠杆菌M15,IPTG诱导表达,用Ni-NTA树脂对表达产物进行变性纯化.通过凝胶(Sephacryl S-200)柱上在位复性后,用竞争ELISA检测复性的3F6 ScFy活性.结果:获得了SCLC抗独特型抗体3F6的VH和VL基因,构建了3F6 ScFv表达质粒.在大肠杆菌中高效表达3F6 ScFv,表达蛋白的相对分子质量为32×103,以包涵体形式存在.纯化后获得较纯的3F6 ScFv蛋白,经复性后可竞争2F7抗体与SCLC NIH-H128细胞结合.结论:成功构建、表达、纯化和复性了SCLC抗独特型抗体3F6 ScFv,获得有活性的3F6 ScFv,为SCLC抗独特型抗体的进一步研究奠定了基础.

关键词：肺肿瘤、癌、小细胞、抗体、抗独特型、基因表达、免疫活性

所属期刊栏目：26

分类号：R73(肿瘤学)

资助基金：上海市科委资助项目034119860;上海市卫生局资助项目203003

在线出版日期：2006-07-31（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：529-532