双效逆转录载体的构建和受控自杀基因在乳腺癌细胞中表达的研究

摘要：

目的构建含有Tet-On基因调节系统及自杀基因HSVtk的重组逆病毒载体,研究其在乳腺癌细胞中HSVtk基因的受控表达.方法用PCR方法扩增Tet-On基因,将其插入pRevTRE/HSVtk,形成重组载体pRevTRE/HSVtk/Tet-On.用脂质体介导法将pRevTRE/HSVtk/Tet-On导入乳腺癌细胞株(MCF-7).经过Hygromycin B筛选建立了一株稳定的受四环素衍生物强力霉素(Doxcycline,Dox)调控表达HSVtk基因的乳腺癌细胞株MCF/TRE/HSVtk/Tet-On.用RT-PCR的方法检测不同Dox浓度下HSVtk基因的表达,以MTT法检测不同Dox浓度下Ganciclovir(GCV)对乳腺癌细胞的杀伤作用.结果成功构建了pRevTRE/HSVtk/Tet-On逆病毒载体.筛选出MCF/TRE/HSVtk/Tet-On细胞株,该细胞能在Dox的诱导下表达HSVtk基因并被GCV杀伤.结论HSVtk基因产物可以将无毒性的Ganciclovir(GCV)转变成一种有毒的代谢产物,杀死乳腺癌细胞.而该基因的表达受到Tet-On调控,由强力霉素调节HSVtk基因表达.

关键词：乳腺肿瘤、细胞系MCF-7、基因治疗、HSVtk基因、Tet-On基因

所属期刊栏目：23

分类号：Q784;R73-36+2(基因工程（遗传工程）)

资助基金：美国中华医学会资助项目99-698

在线出版日期：2003-12-19（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：355-359