知母皂苷AⅢ通过调节Notch信号通路调控骨肉瘤细胞增殖、凋亡和上皮间质转化的机制

摘要：

目的 探讨知母皂苷AⅢ(TSAⅢ)对骨肉瘤细胞(HOS)增殖、侵袭、迁移和上皮间质转化(EMT)等的影响及其潜在机制.方法 用 10 μmol/L及 20 μmol/L的TSAⅢ处理人HOS细胞,另设阴性对照组(Ctrl组)与γ分泌酶抑制剂(DAPT)阳性药物对照组,CCK8、平板克隆、划痕实验与Transwelll来评估TSAⅢ对HOS细胞增殖、迁移、侵袭能力的影响;Western blot检测TSAⅢ对EMT相关蛋白E-钙黏蛋白(E-cad)、细胞间紧密连接蛋白 1(CLDN1)、N-钙黏附蛋白(N-cad)及波形蛋白(Vimentin)表达影响;流式细胞术检测TSAⅢ对骨肉瘤HOS细胞凋亡影响,Western blot检测TSAⅢ对抗凋亡蛋白B细胞淋巴瘤/白血病-2(BCL-2)蛋白及促凋亡蛋白BCL-2 相关X蛋白(BAX)表达影响.构建HOS细胞小鼠模型,分为Ctrl组、DAPT组、TSAⅢ 10 μmol/L组及TSAⅢ20 μmol/L组,21 d后比较各组小鼠肿瘤体积变化,肿瘤组织免疫组化染色比较各组Ki67、凋亡标志物半胱天冬氨酸酶-3 剪切体(Cleaved Caspase3)及Vimentin表达差异;免疫荧光比较E-cad与N-cad表达差异.Western blot检测不同浓度TSAⅢ(0、10、20 μmol/L)、不同时长TSAⅢ(0、6、12 h)与Notch激动剂Jagged1 对Notch通路相关蛋白表达影响.结果 CCK8 结果显示,与Ctrl组比较,10 μmol/L及 20 μmol/L TSAⅢ处理 48h时,细胞增殖受抑制程度最明显(P＜0.01);平板克隆、划痕实验与Transwelll结果显示,TSAⅢ可以抑制HOS细胞增殖、迁移与侵袭;Western blot结果显示,TSAⅢ促进E-cad与CLDN1 蛋白表达,且抑制N-cad与Vimentin蛋白表达.流式细胞术结果显示,TSAⅢ促进骨肉瘤HOS细胞凋亡;Western blot结果显示,TSAⅢ抑制BCL-2 蛋白表达,促进BAX蛋白表达.动物实验结果显示,TSAⅢ抑制肿瘤增长;免疫组化结果显示,Ki67 表达减少,Cleaved-Caspase3及Vimentin表达增加;免疫荧光结果显示,TSAⅢ促进E-cad表达,并抑制N-cad表达.Western blot结果显示,Notch通路相关蛋白表达随TSAⅢ处理时间与浓度的增加而下降,而Jagged1可以解除TSAⅢ对Notch通路的抑制.结论 TSAⅢ可能通过抑制Notch信号通路来抑制骨肉瘤HOS细胞增殖、迁移及侵袭.

关键词：知母皂苷AⅢ、骨肉瘤、Notch信号通路、增殖、侵袭

所属期刊栏目：33

分类号：R738.1;R3;R285.5

资助基金：浙江省医药卫生科研计划项目No.2019KY538

在线出版日期：2023-08-31（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：692-697,709