七氟醚后处理对缺血再灌注大鼠心肌内质网应激反应的影响及可能机制

摘要：

目的 明确七氟醚后处理对缺血再灌注大鼠心肌损伤的保护作用,初步阐明其对心肌内质网应激反应的影响及可能靶点.方法 取SPF级雄性SD大鼠55只,建模取25只,每组5只,分为对照组(sham)和缺血再灌注组(I/R),每组5只.I/R组分别于缺血30 min之后进行再灌注2、4、6和8 h,制造在体心脏左冠状动脉前降支结扎缺血再灌注动物模型,获取心肌损伤和内质网应激反应最理想模型参数.实验取大鼠30只,随机数字表法分为sham组、I/R组、七氟醚后处理组(sevoP,分为2.5％、3.0％亚组)、4-苯基丁酸(4-PBA)复合七氟醚组(4-PBA+2.5％、3.0％sevoP组).sevoP组在行微创左冠状动脉前降支结扎后,即刻吸入相应浓度的七氟醚15 min后洗脱,松开结扎线恢复血流至额定时间,观测心肌HE形态,血清的乳酸脱氢酶(LDH)、肌钙蛋白(cTnI),以及组织的GRP78、CHOP mRNA和蛋白表达,sham组只放线不结扎.利用体外H9C2心肌细胞缺氧/复氧损伤模型(3H/3R),除正常对照组和H/R组外,sevoP组复氧前以2.5％七氟醚处理缺氧箱内H9C2细胞30 min,另两组H9C2细胞分别以小干扰肌浆网Ca2+-ATP酶(siSERCA)和阴性对照(ncSERCA)处理48 h后进行sevoP同样的操作,检测上清液中的上述指标,以及细胞内质网应激蛋白指标.结果 与sham组比较,I/R组大鼠心肌缺血0.5 h再灌注2 h后血清LDH[(5.62±0.68)U/L比(3.44±0.54)U/L,P<0.05]、cTnI[(5.64±1.01)ng/mL比(2.72±0.61)ng/mL,P<0.05]浓度的升高,GRP78蛋白表达到缺血0.5 h再灌注6 h后才增高明显[(2.36±0.49)比(0.38±0.18),P<0.05].与Sham组比较,I/R组大鼠肺组织GRP78、CHOP的mRNA显著高表达(22.22±8.22比1.02±0.27,14.84±2.49比1.01±0.22,P均<0.05),蛋白表达也同样增加(0.59±0.11比2.06±0.36,0.44±0.12比1.97±0.42,P均<0.05).七氟醚后处理能够有效抑制其高表达,4-PBA能够进一步减弱七氟醚的抑制作用.H9C2细胞的H/R损伤和内质网应激可以引起GRP78和CHOP的4倍高表达和细胞上清液中LDH浓度上升(834.60±93.70比417.60±57.07,P<0.05),以2.5％七氟醚后处理降低过度升高的GRP78和CHOP(1.52±0.38比2.46±0.50,1.32±0.23比2.10±0.43,P均<0.05),siSERCA+sevoP+H/R组基因敲低能够减弱七氟醚的保护作用.结论 七氟醚后处理可能能够抑制心肌的缺血再灌注损伤和过度的内质网应激,与心肌细胞Ca2+-ATP酶活性有关.

关键词：大鼠、七氟醚、内质网应激、缺血再灌注、H9C2细胞、细胞低氧

所属期刊栏目：32

分类号：R542.2;R3;R966

资助基金：浙江省医药卫生科技计划项目No.2019ZD053

在线出版日期：2022-12-01（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：1001-1007