miR-100过表达通过增强AMPK-mTOR-p70S6K信号通路介导的自噬发挥抗脓毒症作用的研究

摘要：

目的 探讨miR-100过表达通过增强AMPK-mTOR-p70S6K信号通路介导的自噬,进而发挥抗脓毒症的作用机制研究.方法 利用脂多糖(LPS)刺激大鼠心肌细胞H9C2构建脓毒症体外细胞模型.将大鼠心肌细胞H9C2分为对照组、LPS组、LPS+miR-100激动剂组和LPS+miR-100拮抗剂组.细胞通过转染miR-100的激动剂或抑制剂使miR-100在细胞内过表达或敲低,并用qRT-PCR检测细胞内miR-100的表达水平的改变;ELISA检测不同细胞处理组上清中炎症因子IL-1β、IL-6和TNF-α的释放;细胞免疫荧光检测LC3蛋白在细胞中的表达;Western blot检测自噬相关蛋白(p62、LC3和beclin-1)和AMPK-mTOR-p70S6K通路相关蛋白(AMPK、p-AMPK、mTOR、p-mTOR、p70S6K和p-p70S6K)的表达.结果 与对照组比较,在LPS处理心肌细胞H9C2的脓毒症细胞模型中,血清炎症因子分泌显著增加[TNF-α:(145.05±0.15)pg/mL比(50.35±0.05)pg/mL;IL-6:(35.47±0.08)pg/mL比(12.15±0.11)pg/mL;IL-1β:(141.38±0.11)pg/mL比(72.46±0.09)pg/mL,P<0.05];与LPS组比较,LPS+miR-100激动剂组上调miR-100表达能够诱导增强细胞自噬,并且减弱炎症反应[TNF-α:(71.22±0.06)pg/mL比(145.05±0.15)pg/mL;IL-6:(12.36±0.09)pg/mL比(35.47±0.08)pg/mL;IL-1β:(78.48±0.13)pg/mL比(141.38±0.11)pg/mL,P<0.05];相反,LPS+miR-100拮抗剂组下调miR-100表达减弱了自噬,并且增强了炎症反应[TNF-α:(241.33±0.19)pg/mL比(145.05±0.15)pg/mL;IL-6:(49.78±0.12)pg/mL比(35.47±0.08)pg/mL;IL-1β:(205.69±0.08)pg/mL比(141.38±0.11)pg/mL,P<0.05];进一步研究发现,miR-100能够引起自噬相关信号通路AMPK-mTOR-p70S6K中相关蛋白表达变化.结论 miR-100过表达可能通过上调AMPK-mTOR-p70S6K信号通路介导的自噬水平,发挥抗炎作用,进而在脓毒症中发挥保护作用.

关键词：脓毒症;miR-100;自噬;AMPK-mTOR-p70S6K通路

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资助基金：浙江省医药卫生科技计划项目No.2020KY734

在线出版日期：2022-03-07（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：110-115