白杨黄素通过调控氧化应激反应保护脂多糖介导的炎症环境中人牙周膜干细胞成骨分化能力

摘要：

目的 探讨白杨黄素对牙龈卟啉单胞菌(P.g)脂多糖(P.g LPS)介导的炎症环境中人牙周膜干细胞(hPDLSCs)成骨分化能力的影响.方法 原代培养hPDLSCs,采用流式细胞术鉴定后取第4代细胞进行实验.采用四唑盐(MTT)试验检测不同浓度P.g LPS(1、10、100、1000ng/mL)及白杨黄素(0.1、0.4、1.6、6.25、25、50、100μmol/L)对hPDLSCs增殖能力的影响;P.g LPS与成骨诱导剂共培养24、48、72和96h后,活性氧(ROS)试剂盒检测hPDLSCs的ROS含量,实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-PCR)检测hPDLSCs锰超氧化物歧化酶(MnSOD),铜锌超氧化物歧化酶(Cu/ZnSOD)和过氧化氢酶(CAT)mRNA表达;P.g LPS与成骨诱导剂共培养3、7、14天后,碱性磷酸酶(ALP)试剂盒检测hPDLSCs的ALP活性,RT-PCR法检测Runt相关转录因子2(RUNX2),锌指结构转录因子(OSX),ALP和骨钙素(OCN)mRNA表达;25μmol/L白杨黄素作用hPDLSCs后,通过ROS试剂盒检测hPDLSCs的ROS含量,实时PCR法检测抗氧化因子MnSOD、Cu/ZnSOD、CAT及成骨分化基因RUNX2、OSX、OCN和ALP mRNA表达.结果 MTT结果显示,与对照组比较,1000ng/mL P.g LPS作用hPDLSCs 72、96h,细胞增殖活性受到显著抑制[72h:(0.51±0.03)比(0.75±0.01);96h:(0.62±0.06)比(0.98±0.02),P均<0.05];25μmol/L的白杨黄素对hPDLSCs细胞活力无抑制效应[(99.83±1.02)％比(100.00±1.02)％,P>0.05];与成骨诱导液组比较,P.g LPS显著增加hPDLSCs的ROS含量[72h:(14.80±0.97)ng/mL比(2.97±2.31)ng/mL;96h:(17.30±1.34)ng/mL比(3.17±1.06)ng/mL,P均<0.05],显著降低抗氧化因子MnSOD mRNA[72h:(1.54±0.13)比(1.06±0.38);96h:(0.95±0.05)比(1.18±0.04)]、Cu/ZnSOD mRNA[72h:(1.01±0.15)比(2.69±0.23);96h:(0.89±0.24)比(2.84±0.29),P均<0.05]和CAT mRNA[72h:(1.25±0.08)比(2.54±0.15);96h:(1.12±0.09)比(2.64±0.28),P均<0.05]表达水平,降低成骨分化基因表达[RUNX2 mRNA:(1.42±0.13)比(1.97±0.16);OSX mRNA:(1.97±0.16)比(2.68±0.19);OCN mRNA:(1.23±0.11)比(2.56±0.17);ALP活性:(0.94±0.11)比(1.25±0.14);P均<0.05];与P.g LPS+成骨诱导液组比较,白杨黄素显著改善Pg LPS介导hPDLSCs的氧化状态[ROS:(6.21±1.06)ng/mL比(17.98±1.25)ng/mL;MnSOD mRNA:(1.68±0.14)比(1.47±0.55);Cu/ZnSOD mRNA:(1.97±0.23)比(1.47±0.06);CAT mRNA:(2.42±0.34)比(1.87±0.11)]及增强其成骨分化能力[RUNX2 mRNA:(1.96±0.28)比(1.57±0.23);OSX mRNA:(2.16±0.31)比(1.64±0.17),P均<0.05].结论 白杨黄素可能对P.g LPS介导的炎症环境中人牙周膜干细胞的成骨分化能力具有促进作用.

关键词：白杨黄素;hPDLSCs;成骨分化;P.g LPS

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资助基金：杭州市科技局项目No.20180533B76

在线出版日期：2021-10-28（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：892-898