TJ-5抑制ubch5c介导NEMO泛素化调控NF-κB通路对MHD患者体内微炎症的影响

摘要：

目的 观察倍半萜内酯化合物TJ-5调控泛素结合酶(ubch5c)介导NF-κB必须调节蛋白(NEMO)泛素化对维持性血液透析(MHD)患者体内微炎症的影响.方法 选取2018年2月-2019年2月浙江中医药大学附属湖州中医院收治的MHD患者60例,同期选取体检中心健康体检者20名.抽取MHD患者和健康者外周血,分离单一核细胞(PBMC)及CD4+T细胞.分离纯化得到的外周血CD4+T细胞使用不同浓度TJ-5处理,MHD患者血样本分离纯化得到的CD4+T细胞分为空白组(0μM/mL TJ-5处理)和高、低浓度组(10、5μM/mL TJ-5处理),每组20份,健康对照组(健康者不予处理)20份.ELISA法检测MHD患者外周血CD4+T细胞经TJ-5处理后肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)、白介素-6(IL-6)及白介素-10(IL-10)表达情况;Western Blot法检测MHD患者和健康志愿者外周血CD4+T细胞核转录因子(P65)、Ⅰ-κB(NF-κB抑制蛋白)蛋白及其磷酸化;采用镍柱亲和纯化获得ubch5c,通过体外泛素化实验检测泛素连接酶ubch5c活性变化情况;免疫共沉淀法检测NEMO线性泛素化情况.结果 MHD患者外周血Th17/Treg比例显著高于健康志愿者[(1.57±0.25)％比(0.93±0.11)％,P＜0.05];与空白组比较,TJ-5处理后,低、高浓度组CD4+T细胞促炎性因子TNF-α、IL-1β和IL-6明显下调[TNF-α:(5.53±0.37)ng/L、(2.27±0.26)ng/L比(8.11±1.05)ng/L,P均＜0.05;IL-1β:(1.59±0.30)pg/L、(0.84±0.22)pg/L比(2.75±0.46)pg/L,P均＜0.05;IL-6: (30.94±6.47)pg/L、(12.81±5.51)pg/L比(41.26±7.25)pg/L,P均＜0.05];抗炎性因子IL-10明显上调[(15.82±1.01)pg/L、(20.47±1.16)pg/L比(7.34±1.71),P均＜0.05];与空白组比较,核转录因子(P65)、磷酸化p65(p-P65)水平显著下调[P65: (0.72±0.12)、(0.40±0.10)比(1.19±0.14),P均＜0.05;p-P65:(0.27±0.15)、(0.18±0.11)比(0.32±0.11),P均＜0.05];核因子κB(NF-κB)抑制蛋白(Ⅰ-κB)显著上调[(0.40±0.14)、(0.56±0.12)比(0.27±0.08),P均＜0.05;磷酸化Ⅰ-κB(p-Ⅰ-κB)显著下调[(0.53±0.17)、(0.33±0.08)比(0.76±0.14),P均＜0.05];ubch5c活性抑制率增高[(11.18±2.11)、(26.80±2.68)比(0.00±0.00),P均＜0.05];NEMO线性泛素化减弱[(0.573±0.036)、(0.234±0.037)比(0.833±0.079),P均＜0.05].结论 倍半萜内酯化合物TJ-5能拮抗CD4+T细胞ubch5c活性,抑制NEMO线性泛素化调控NF-κB通路及炎症因子表达,改善MHD患者微炎症.

关键词：维持性血液透析、微炎症、泛素化、NF-κB通路、倍半萜内酯

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资助基金：浙江省湖州市公益性技术应用研究一般项目No.2018GY35

在线出版日期：2020-06-10（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：5-9,后插2