嘌吗啡胺靶向激活Hedgehog信号通路调控骨髓来源间充质干细胞成骨-成脂分化平衡的机制研究

摘要：

目的 探讨小分子药物嘌吗啡胺(PM)靶向激活Hedgehog(Hh)信号通路后对骨髓来源间充质干细胞(BM-SCs)成骨-成脂分化平衡的影响及其机制.方法 通过细胞计数试剂盒-8法评估PM对BMSCs增殖的细胞毒性,并通过检测不同浓度PM处理下BMSCs细胞内Gli1转录水平,选择合适的PM处理浓度.随后通过诱导BMSCs成骨、成脂分化,检测ALP表达(ALP染色)、钙结节(Von Kossa矿化结节染色法)评估PM对BMSCs成骨诱导的影响,采用油红O染色检测PM对BMSCs成脂诱导的影响.最后通过qRT-PCR法验证PM干预下BMSCs成骨-成脂分化过程中相关核心转录因子、特征基因的变化.结果 10 μmol/L及以下浓度的PM对BMSCs增殖无明显毒性反应,并且2 μmol/L PM即可显著激活BMSCs细胞内Hh信号通路(P＜0.01).在2 μmol/LPM干预下,BMSCs成骨分化诱导时ALP表达、钙结节形成较对照组显著增强,而成脂分化诱导时脂滴的形成受到了明显的抑制.在此基础之上,qRT-PCR结果提示2 μmol/L PM可明显促进BMSCs成骨分化过程中核心转录因子Sp7以及特征性基因ALP、整合素结合唾液酸蛋白(lbsp)的转录,并抑制成脂分化过程中核心转录因子过氧化物酶体增殖物激活受体γ(Pparg)、CCAAT增强子结合蛋白α(Cebpa)以及特征基因围脂滴蛋白1(Plin1)、脂联素(Adipoq)、脂肪酸转位酶(Cd36)的转录.结论 PM可通过激活Hh信号通路,调控成骨-成脂分化相关核心转录因子,促进BMSCs成骨分化并抑制其成脂分化.

关键词：骨质疏松、间充质干细胞、Hedgehog信号通路、细胞分化

所属期刊栏目：45

分类号：R737.9;R318;R575

资助基金：浙江省基础公益研究计划项目LGF20H250004

在线出版日期：2023-10-13（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共8页

页码：1812-1817,1841,后插2