miR-16-5p通过调控PD-L1表达影响肝星状细胞炎症反应的研究

摘要：

目的 分析miR-16-5p在肝星状细胞中对程序性死亡受体-1(PD-1)表达的影响,并探讨其在肝纤维化及炎症反应中的作用机制.方法 以大鼠肝星状细胞HSC-T6为研究对象,用5 ng/ml转化生长因子β1(TGF-β1)处理细胞0、24、48、72 h后,光镜下观察细胞形态,RT-qPCR法检测细胞TNF-α和IFN-γ表达水平,筛选出TGF-31最佳作用时间.将细胞分为6组:对照组、模型组、miR-16-5p超表达组、miR-16-5p抑制组、超表达-空载组、抑制-空载组,采用RT-qPCR法检测miR-16-5p表达水平以验证转染效果;光镜下观察细胞形态变化;采用CCK-8试剂盒检测细胞增殖能力;采用Western blot法检测细胞PD-1配体(PD-L1)、NF-KB、p-NF-KB蛋白表达水平;采用RT-qPCR法检测细胞miR-16-5p、PD-L1以及炎症因子TNF-α、IFN-γ、IL-6和IL-10 mRNA表达水平.结果 5 ng/ml TGF-β1处理细胞0、24、48、72 h后,细胞增殖且形态发生改变;炎症因子TNF-α、IFN-γ 在TGF-β1处理48 h时后表达水平均明显增高(均P＜0.05).与模型组相比,对照组和miR-16-5p超表达组细胞miR-16-5p的mRNA表达水平以及PD-L1和IL-10蛋白表达水平均明显升高(均P＜0.05),p-NF-κB/NF-κB的蛋白表达水平以及TNF-α、IFN-γ和IL-6的mRNA表达水平均降低(均P＜0.05),miR-16-5p超表达组细胞增殖能力降低(P＜0.05);miR-16-5p 抑制组miR-16-5p、PD-L1、IL-10的mRNA表达水平均降低(均P＜0.05),p-NF-KB/NF-KB的蛋白表达水平以及TNF-α、IFN-γ、IL_-6的mRNA表达水平均升高(均P＜0.05),细胞增殖能力增强(P＜0.05).结论 miR-16-5p在肝星状细胞中通过调控PD-L1表达降低肝细胞炎症水平,抑制细胞增殖,其机制可能参与抑制肝纤维化发生.

关键词：HSC-T6肝星状细胞、miR-16-5p、程序性死亡受体-1、炎症因子、肝纤维化

所属期刊栏目：44

分类号：R737.9;R587.1;R285.5

资助基金：湖北省卫生健康委员会科研项目WJ2019F094

在线出版日期：2022-11-14（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：2049-2055