小鼠胰岛密度梯度离心方法的研究
目的探索最优的密度梯度离心方案,提高胰岛的纯度和得率,为胰岛移植相关研究奠定基础。方法采用雄性Balb/c小鼠作为供体分离胰岛,以0.5mg/ml胶原酶Ⅺ灌注和消化胰腺,通过不同的密度梯度离心策略分离纯化胰岛,进行双硫腙(DTZ)特异染色法染色,显微镜下观察胰岛的纯度和得率,并通过吖啶橙(AO)/碘化丙啶(PI)染色检查分离获得的胰岛活性,最终确定最佳的密度梯度离心方法。结果 Balb/c小鼠在Ficol-1.108(4ml)、1.096(2ml)、1.069(2ml)、HBSS(2ml),加速度1、减速度1、400r/min、4min中转1800r/min、8min离心后胰岛得率为(125±39)IEQ、纯度为(79.6±10.5)%,经相同条件二次梯度后得率无明显降低但纯度明显提高,达(96.2±1.4)%。经AO/PI染色鉴定分离胰岛活性良好。结论本研究所采用的小鼠胰岛密度梯度离心方法很有效,能稳定地获得纯度较高且数量可观的胰岛。
胰岛、分离纯化、密度梯度离心
R58;TQ0
浙江省科技厅创新团队项目2009R50038
2014-01-23(万方平台首次上网日期,不代表论文的发表时间)
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