GeXP多重PCR法同时检测5种致泻性大肠埃希菌

摘要：

目的 基于GeXP多重基因表达遗传分析系统,建立快速、同时检测5种致泻性大肠埃希菌的方法.方法 根据肠产毒性大肠埃希菌(ETEC)、肠侵袭性大肠埃希菌(EIEC)、肠致病性大肠埃希菌(EPEC)、肠集聚性大肠埃希菌(EAEC)和肠出血性大肠埃希菌(EHEC)的12种毒力基因的保守序列设计特异性引物,用单组引物分别进行PCR扩增,验证单模板单引物PCR的特异性.分别以5种致泻性大肠埃希菌基因组DNA为模板,每个体系中混合12种引物进行PCR扩增,验证单模板多重PCR的特异性.采用GeXP多重PCR分别扩增106、105、104、103CFU/mL的5种致泻性大肠埃希菌混合菌悬液DNA模板,分析该方法的灵敏度.用购自超市和农贸市场的食品制作34份加标样品,采用GeXP多重PCR鉴定5种致泻性大肠埃希菌,并与多重实时荧光PCR检测试剂盒检测结果比较.结果 单模板单引物PCR产物中,12种毒力基因sthi、pic、bfpB、astA、lt、escV、aggR、stx1、uiidA、invE、stx2、stp扩增片段大小与设计相符,荧光信号值良好,均在25 000 A.U.以上.GeXP单模板多重PCR体系中,5种致泻性大肠埃希菌的12种毒力基因PCR产物片段大小与设计相符,特异性良好.菌液浓度为103 CFU/mL时,GeXP多重PCR可同时检测出12种毒力基因,荧光信号强度良好,重复检测结果相同,变异系数＜10％.采用GeXP多重PCR检测34份加标样品,检出ETEC 3株,EAEC 12株,EIEC、EPEC和EHEC各1株,与商品化的5种致泻性大肠埃希菌多重实时荧光PCR检测结果一致.结论 本研究建立了一种同时检测5种致泻性大肠埃希菌12种毒力基因的GeXP多重PCR方法,可用于致泻性大肠埃希菌的临床鉴别诊断及流行病学调查研究.

关键词：GeXP系统、致泻性大肠埃希菌、毒力基因、多重PCR

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分类号：R378.21(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)

资助基金：国家重点研发计划;浙江省自然科学基金;浙江省医药卫生科技计划;浙江省医药卫生科技计划

在线出版日期：2022-11-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：1075-1080