葡萄球菌肠毒素A基因的克隆、原核表达和鉴定

摘要：

目的克隆葡萄球菌肠毒索A(SEA)基因,构建其原核表达系统,鉴定重组蛋白(rSEA)免疫原性.方法采用PCR技术,从产SEA的葡萄球菌标准菌株ATCC13565基因组DNA中扩增全长SEA基因片段,T-A克隆后测序,构建pET32a-SEA表达质粒,转化入E.coli BL21DE3宿主菌,通过IPTG诱导表达,分离、纯化及Western印迹法鉴定.结果PCR获得SEA基因片段,DNA测序结果与已报道的SEA基因序列(GenBank No:L22566,AP004828)一致,构建了pET32a-SEA表达质粒,并成功地诱导、纯化了rSEA蛋白,rSEA表达量约为细菌总蛋白的40%.结论成功克隆了SEA全长基因,构建了rSEA原核表达系统,为进一步研制SEA的单克隆抗体及诊断试剂盒奠定了基础.

关键词：葡萄球菌肠毒素A、基因克隆、原核表达

所属期刊栏目：18

分类号：R378.1+1(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)

资助基金：浙江省科技计划2003C34010;嘉兴学院校科研和教改项目70105007

在线出版日期：2006-07-19（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共3页

页码：4-5,8