枣疯病植原体胸苷激酶基因的克隆、序列分析与原核表达

摘要：

枣疯病(jujube witches'-broom,JWB)俗称枣树的"癌症",是由枣疯病植原体导致的侵染性病害,给我国的枣栽培与生产造成了严重危害,对枣疯病植原体增殖基因的研究有助于枣疯病的有效防治.为获得枣疯病植原体胸苷激酶基因(tdk),利用PCR方法扩增该基因并测序,结果表明,该基因的开放阅读框长度为576 bp,编码191个氨基酸,其蛋白质分子量为21.76 ku.序列分析和预测表明,该蛋白质为植原体细胞质中性质相对稳定的亲水蛋白质.遗传距离和进化树分析显示,植原体tdk基因比其16S rDNA基因的保守程度低,tdk基因和16S rDNA基因序列的进化树高度相似,表明tdk基因适于植原体分子分类.为获得枣疯病植原体TDK蛋白,成功构建了原核表达载体pET-28a-JWB-Heze-tdk;在诱导条件为0.1 mmol·L-1 IPTG、20℃、140 r·min-1时,该原核表达载体在Escherichia coli BL21(DE3)菌株中可表达出大量可溶性的N端融合了6 × His标签的JWB-Heze TDK蛋白;利用Ni-IDA琼脂糖树脂纯化出了可溶性的JWB-Heze TDK融合蛋白.研究结果为JWB-Heze TDK体外酶活性测定和抗体制备奠定了基础.

关键词：枣疯病、植原体、胸苷激酶、基因克隆、原核表达、蛋白质纯化

所属期刊栏目：35

分类号：S436.629(病虫害及其防治)

资助基金：山东省自然科学基金;国家自然科学基金;菏泽学院博士基金;菏泽学院培育项目;菏泽学院培育项目

在线出版日期：2023-09-06（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共10页

页码：1763-1772