柑橘黑点病菌(Diaporthe citri)快速分子检测技术

摘要：

柑橘黑点病是一种严重危害柑橘生产的世界性真菌病害,快速及时地检测出柑橘黑点病病菌(Dia-porthe citri)对柑橘黑点病早期诊断和科学防控具有重要的实践意义.本研究基于β-微管蛋白序列,设计柑橘黑点病病菌的特异引物对,基于常规PCR和SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR(qRT-PCR)建立了快速分子检测体系,对柑橘黑点病病菌的菌丝和典型带病叶片进行检测验证.结果发现,在常规PCR检测中,该引物可从柑橘黑点病病菌获得244 bp的特异性扩增片段,检测灵敏度达0.78 ng·μL-1;在实时qRT-PCR中,该引物也只有在柑橘黑点病病菌中获得唯一的产物吸收峰,检测灵敏度达0.35 ng·μL-1.利用PCR检测体系对发病黑点叶片进行检测,结果显示,常规PCR的阳性检出率为30％,qRT-PCR的阳性检出率为60％,表明qRT-PCR比常规PCR的灵敏度更高.因此,研究设计的柑橘黑点病病菌特异性引物,以及所建立的常规和实时qRT-PCR检测方法具有速度快、特异性强等特点,可以用于柑橘黑点病病菌的分子鉴定,对病害诊断具有参考价值.

关键词：柑橘黑点病菌、β-微管蛋白序列、SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR、常规PCR检测

所属期刊栏目：34

分类号：S436.66(病虫害及其防治)

资助基金：浙江省重点研发计划;现代农业柑橘产业技术体系CARS-26

在线出版日期：2022-08-03（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共9页

页码：1457-1465