少孢节丛孢菌XJ-A1几丁质酶AO-483基因的克隆及生物学活性

摘要：

为弄清少孢节丛孢菌几丁质酶的生物学功能,对少孢节丛孢菌XJ-A1几丁质酶AO-483基因进行克隆及分子特征分析,并在大肠埃希菌中进行诱导表达;采用DNS还原糖法检测经镍柱纯化的重组几丁质酶活性,将其作用于秀丽隐杆线虫幼虫,分析其生物活性.结果显示,AO-483基因编码309个氨基酸,与少孢节丛孢菌标准株(ATCC 24927)的几丁质酶AO-483基因序列的同源性为96.88％,氨基酸序列同源性为97.73％;AO-483含有1个Glyco-hydro-18结构域,位于20～297位氨基酸,属于糖苷水解酶18家族,还含有特征序列GMLGG和LDGLDLDVE;三级结构为典型的三磷酸异构酶桶形结构.SDS-PAGE分析结果表明,重组蛋白AO-483分子质量约为52 ku,与预测大小一致;Western blot分析证实,该重组蛋白能与小鼠抗少孢节丛孢菌多克隆血清抗体发生特异性反应.经DNS还原糖法检测,该重组几丁质酶活性为223.31 U·mL-1;重组几丁质酶对秀丽隐杆线虫Ⅰ期和Ⅳ期幼虫有较强的降解活性.

关键词：少孢节丛孢菌、几丁质酶、克隆、生物学活性

所属期刊栏目：31

分类号：Q78(基因工程（遗传工程）)

资助基金：国家自然科学基金31460654,31260601;新疆自治区研究生科研创新项目XJGRI2015038

在线出版日期：2019-03-28（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：222-228