鸡γ干扰素在酵母中的分泌表达

摘要：

根据GenBank已发表的鸡γ干扰素(ChIFN-γ)cDNA基因序列设计一对引物,以ConA刺激8 h后的鸡全血淋巴细胞提取的总RNA为模板.通过RT-PCR方法克隆出ChIFN-γ基因,将其连接到pMD18-T载体上获得阳性重组质粒.测序结果表明.该ChIFN-γ与GenBank上发表的ChIFN-γ序列的同源性可达99.6%,其含有1个495 bp的开放性阅读框架.编码164个氨基酸.通过Kpn Ⅰ和Not Ⅰ两个酶切位点将该基因插入酵母表达载体(pPICZa-A).并将该重组酵母ChIFN-γ载体线性化,通过电转化使ChIFN-γ基因整合到酵母(X-33)基因组上,经甲醇诱导后,成功表达出ChIFN-γ.利用Western-blotting分析测定表达的ChIFN-γ蛋白的活性.结果表明,本试验得到的重组酵母ChIFN-γ是具有反应原性的蛋白.

关键词：鸡γ干扰素、克隆、分泌表达

所属期刊栏目：21

分类号：Q78(基因工程（遗传工程）)

资助基金：江苏省农业科学院院基金项目6110738

在线出版日期：2010-01-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：450-454