农杆菌介导的香榧幼胚遗传转化体系

摘要：

[目的]以香榧Torreya grandis?'Merrillii'幼胚为受体材料,开展农杆菌Agrobacterium tumefaciens介导的遗传转化研究,揭示影响香榧遗传转化的关键因素,以建立农杆菌介导的香榧幼胚遗传转化体系.[方法]以香榧种子突破种鳞后第8周至第11周的幼胚作为转基因受体材料,比较受体胚龄、农杆菌菌液浓度、侵染时间、抗生素质量浓度对遗传转化效率的影响,并采用潮霉素、绿色荧光蛋白GFP表达及GFP基因聚合酶链式反应对遗传转化香榧幼胚培养物进行阳性筛选.[结果]随着胚龄的增加,香榧幼胚抗逆性增强,污染率降低,成活率提高,第10周和第11周幼胚成活率分别为52.1％和52.3％.农杆菌菌液浓度和侵染时间均对香榧幼胚的污染率、成活率、愈伤组织诱导率以及体胚发生率具有显著影响(P<0.05).菌液吸光度[D(600)]为0.5时,香榧幼胚愈伤组织诱导率和体胚发生率最高,分别为17.9％和17.3％;侵染时间为10?min时,愈伤组织诱导率和体胚发生率为最高,分别达17.5％和17.1％.羧苄青霉素对于受体材料的农杆菌脱除具有显著影响(P<0.05),当羧苄青霉素质量浓度为300?mg·L?1时,成活率、愈伤组织诱导率和体胚发生率均最高,分别为60.5％、15.8％和17.5％.潮霉素对于香榧幼胚培养物的阳性筛选具有良好的效果,当潮霉素质量浓度为100?mg·L?1时,成活率为30.5％.[结论]不同胚龄香榧幼胚遗传转化效果不同,突破种鳞后第10周香榧幼胚遗传转化效果良好;当农杆菌菌液D(600)为0.5,侵染时间为10?min时,转化效果最佳;300?mg·L?1为羧苄青霉素脱除农杆菌的最佳质量浓度;100?mg·L?1是潮霉素阳性香榧幼胚筛选的最佳质量浓度.图3表5参37

关键词：香榧;幼胚;农杆菌介导的遗传转化;羧苄青霉素;潮霉素

所属期刊栏目：39

分类号：S722.3(造林学、林木育种及造林技术)

资助基金：浙江省重点研发计划项目;中央财政林业科技推广示范项目;浙江省科技厅重大专项;浙江省科技厅重点研发项目

在线出版日期：2022-03-10（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共9页

页码：13-21