景宁木兰热胁迫下实时荧光定量PCR内参基因的筛选

摘要：

高温对景宁木兰Magnolia sinostellata生长产生严重影响.通过筛选景宁木兰热胁迫下稳定表达的内参基因,可以为景宁木兰在高温条件下基因表达研究提供准确数据,达到对目的基因进行准确量化的目的.以热胁迫下景宁木兰1年生实生苗的根、 茎、 叶组织为材料,从转录组数据库中选取13个管家基因ACTIN-7(肌动蛋白基因-7),CYP(亲环蛋白基因),EF-1α(延伸因子-1α 蛋白基因),GAPDH(甘油醛-3-磷酸脱氢酶基因),GTB(GTP结合蛋白基因),NAC(NAC域蛋白基因),NADP(异柠檬酸脱氢酶基因),TEF(翻译延伸因子基因),UBC(泛素化酶基因),UBQ(多聚泛素蛋白基因),α-TUB(α 微管蛋白基因),β-TUB(β 微管蛋白基因)和18S(18S核糖体RNA),通过Primer 5.0进行引物设计,琼脂糖电泳和溶解曲线分析验证引物特异性;利用实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)技术和geNorm,NormFinder和BestKeeper等3个内参分析软件研究候选内参基因在热胁迫下不同组织中的表达稳定性,并通过CSLD3和KOR 2个目的基因的表达分析验证其可靠性.13个内参基因的电泳结果均显示单一条带,溶解曲线也均显示单一峰,证明引物特异性良好;13对引物的扩增效率均在100％左右;内参软件综合分析得到,UBC,EF-1α 和ACTIN-7是景宁木兰在热胁迫下较为稳定的内参基因,以3个单独的内参基因以及内参组合(EF-1α 和ACTIN-7)为参照对CSLD3和KOR的表达模式进行校准,也显示了一致的表达水平.通过qRT-PCR技术和内参软件分析,UBC,EF-1α 和ACTIN-7等3个内参基因在景宁木兰热胁迫下不同组织中稳定性较高,CSLD3和KOR等2个目的基因的表达也证实了其可靠性.因此,UBC,EF-1α 和ACTIN-7可以作为景宁木兰热胁迫下稳定表达的内参基因.

关键词：林木育种学、景宁木兰、内参基因、热胁迫、实时荧光定量

所属期刊栏目：36

分类号：S718.46(林业基础科学)

资助基金：浙江省农业新品种选育重大科技专项2016C02056-12;国家林业公益性行业科研专项201504322

在线出版日期：2019-10-15（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共8页

页码：935-942