毛竹丙酮酸磷酸双激酶调节蛋白基因克隆、原核表达及纯化

摘要：

丙酮酸磷酸双激酶调节蛋白(pyruvate,orthophosphate dikinase regulatory proteins,RP)是通过调控丙酮酸磷酸双激酶(pyruvate,orthophosphate dikinase,PPDK)参与C4途径光合碳循环途径.毛竹Phyllostachys edulis作为一种重要的经济竹种,分析克隆RP基因对于竹类植物光合作用的研究具有重大理论和应用价值.通过逆转录实时聚合酶链式反应(RT-PCR)成功克隆得到毛竹PeRP1,该基因cDNA全长1 275 bp,编码425个氨基酸;经生物信息学预测,该蛋白属于kinase-PPPase超家族,主要含有UDF 299保守结构域;经多序列比对发现毛竹PeRP1蛋白与C3植物中RP1亲缘关系较近,而与C4植物亲缘关系较远.为了研究PeRP1的蛋白质结构,我们将PeRP1蛋白进行原核表达,利用Ni-NTA树脂亲和层析结合分子筛(SEC)层析的方法纯化得到了PeRP1重组蛋白.SEC纯化的结果表明:PeRP1蛋白在溶液中主要以多聚体形式存在,二聚体及单体含量较少,推测PeRP1蛋白可能以多聚体形式参与调控PPDK蛋白.这为今后研究该蛋白的结构与功能打下了良好基础.

关键词：植物学、毛竹、丙酮酸磷酸双激酶调节蛋白、基因克隆、原核表达、蛋白纯化

所属期刊栏目：32

分类号：S718.3(林业基础科学)

资助基金：国家自然科学基金资助项目31270715;浙江省自然科学基金资助项目LY14C160009

在线出版日期：2015-11-04（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：749-755