麻楝ISSR-PCR反应体系的建立及优化

摘要：

模板DNA、引物、三磷酸碱基脱氧核苷酸(dNTPs),镁离子(Mg2+)浓度、Taq DNA聚合酶的用量以及退火温度是影响简单序列重复区间扩增-聚合酶链式反应(ISSR-PCR)的主要因素.以麻楝Chukrasia tabularis叶片基因组DNA为试验材料,系统地测试这6个因素对麻楝ISSR-PCR反应结果的影响.结果表明:最优的反应体系为20 μL反应体系中含30 ng模板DNA,1.00 μmol ·L-1随机引物,0.15 mmol·L-1dNTPs,2.50 mmol·L-1 Mg2+,2.50×16.67nkat Taq DNA聚合酶.最佳退火温度为56℃,ISSR-PCR反应程序为94℃预变性5.0 min,94℃变性45 s,56℃退火45 s,72℃延伸1.5 min,40个循环；72℃再延伸7.0 min,4℃保存.应用优化的ISSR-PCR反应体系对24份麻楝个体材料进行扩增,均能扩增出丰富稳定的条带.

关键词：林木育种学、麻楝、ISSR、PCR条件、优化

所属期刊栏目：30

分类号：S722.3(造林学、林木育种及造林技术)

资助基金：国家引进国际先进农业科学技术计划"948"计划项目2009-4-02

在线出版日期：2013-09-10（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：620-626