光皮桦EST-SSR PCR反应体系的优化

摘要：

为获得稳定的聚合酶链式反应(PCR)产物,采用正交设计L25(56)对光皮桦Betula luminifera表达序列标签-简单重复序列聚合酶链式反应(EST-SSR PCR)反应体系中的5个因素:DNA模板浓度,引物浓度,镁离子(Mg2+)浓度,三磷酸碱基脱氧核苷酸(dNTPs)浓度和DNA聚合酶量进行优化,每个因素设计5个水平.优化试验结果表明:光皮桦EST-SSR最佳PCR反应体系:4.0 mg·L-1DNA模板,0.500 μmol·L-1引物,1.250 mmol· L-1 Mg2+,0.250mmol· L-1dNTPs,0.072 5×16.67 mkat·L-1rTaq酶.通过梯度PCR试验筛选得到相应引物的最佳退火温度.对优化出的EST-SSR PCR反应体系进行稳定性检测,结果均能获得稳定、清晰可辨的DNA谱带.

关键词：林木育种学、光皮桦、EST-SSR、PCR反应体系、正交设计

所属期刊栏目：29

分类号：S792.15;Q78(森林树种)

资助基金：浙江省重大科技专项2008C02004-1

在线出版日期：2013-03-21（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：960-965