草鱼呼肠孤病毒GCRV 096 VP7蛋白的表达及免疫原性

摘要：

[目的]研究草鱼呼肠孤病毒(grass carp reovirus,GCRV)096 vp7基因的原核和真核表达及其编码蛋白的免疫原性.[方法]应用RT-PCR技术获得GCRV 096 vp7基因,构建GCRV 096 vp7基因原核表达载体pET-VP7,用原核表达的GCRV 096 VP7蛋白免疫草鱼(Ctenopharyngodon idellus)15 d后,用GCRV 096和GCRV GD108分离株对其攻毒,检测GCRV 096 VP7的免疫原性.构建GCRV 096 vp7基因真核表达载体pEGFP-N3-VP7,分析其在草鱼CIK细胞中的表达.[结果与结论]GCRV 096 vp7基因的开放阅读框ORF(GenBank登录号为JN206665)为831 bp,编码276个氨基酸.成功构建GCRV 096 vp7基因原核表达载体pET-VP7,并在大肠杆菌BL21中诱导表达成功;最优表达条件是0.2 mm/L IPTG、28℃下表达5 h,通过HisTrap HP柱纯化融合蛋白,Western blot分析结果表明,所表达的蛋白为目的蛋白.经免疫及GCRV攻毒后,GCRV 096(Ⅰ型)免疫组vp7基因的表达水平降低(P<0.05),而GCRV GD108(Ⅱ型)免疫组vp7基因的表达无显著差异,表明GCRV 096 VP7蛋白对GCRV 096具有良好的免疫效果,但对GCRV GD108无明显的免疫效果.成功构建GCRV 096 vp7基因真核表达载体pEGFP-N3-VP7,Western blot分析结果表明,GCRV 096 VP7蛋白在草鱼肾(CIK)细胞中成功表达.

关键词：草鱼呼肠孤病毒、vp7基因、表达、免疫原性

所属期刊栏目：40

分类号：Q78;Q959.46+8(基因工程（遗传工程）)

资助基金：国家自然科学基金;广东省自然科学基金;湛江市科技计划;广东外语外贸大学校级项目;国家重点基础研究发展计划（973计划）

在线出版日期：2020-07-09（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：1-6