溶藻弧菌HY9901血红素结合蛋白HutB的原核表达及纯化

摘要：

为探究溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus)HY 9901血红素结合蛋白HutB作为疫苗候选抗原的可能性,采用PCR方法扩增V.alginolyticus HY9901 hutB基因全长序列,克隆到pMD18-T载体,经双酶切、连接后,定向插入到pET-28a(+)中,构建原核表达载体pET-HutB,转入大肠杆菌BL21(DE3)中进行IPTG诱导表达.SDS-PAGE验证后,优化诱导表达条件和纯化条件,并进行Western-blot分析.结果表明,HutB蛋白在Ecoli中诱导表达的最优条件:0.4 mmol/L IPTG,37℃诱导4h,表达的蛋白分子量与预期大小相符,主要以包涵体的形式存在,300 mmol/L咪唑洗脱时效果最佳,能与鼠抗His-tag单抗特异性结合.

关键词：溶藻弧、hutB基因、原核表达、优化、纯化

所属期刊栏目：34

分类号：S941(水产保护学)

资助基金：国家科技支撑计划2012BAD17B02、2012 BAD17B03;广东省自然科学基金S2013040014562

在线出版日期：2014-09-28（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：47-51