溶藻弧菌Ⅲ型分泌系统注射装置蛋白VscO的原核表达及免疫原性

摘要：

为探究溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus)Z J03株Ⅲ型分泌系统(Type Ⅲ secretion system,T3SS)注射装置蛋白VscO作为疫苗候选抗原的可能性,根据GeneBank上登陆的溶藻弧菌VscO序列(NO.KJ179947),设计1对带酶切位点的特异性引物,PCR扩增vscO基因,序列分析结果显示,该基因全长462 bp,理论分子质量为18.430ku.将vscO基因定向插入原核表达载体pET-28a(+),构建重组表达质粒pET-vscO.用异丙基-βD-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导后,可在大肠杆菌(Escherichia coli)BL21(DE3)中表达分子质量约为22 ku的VscO融合蛋白,且该蛋白主要以包涵体形式存在.VscO蛋白表达和纯化的最优条件为:0.1 mmol/LIPTG、37℃条件下诱导4h,咪唑洗脱浓度为400 mmol/L.用纯化后的融合蛋白免疫SPF级小鼠,获得高效多克隆抗体.Western-blotting结果表明,鼠抗VscO血清既能与重组VscO蛋白发生反应,也能与分离自溶藻弧菌约22 ku的天然蛋白发生反应,提示T3SS注射装置蛋白VscO可能是溶藻弧菌的重要保护性抗原之一.

关键词：溶藻弧菌、vscO基因、Ⅲ型分泌系统、原核表达、免疫原性

所属期刊栏目：34

分类号：Q786;S917.1(基因工程（遗传工程）)

资助基金：国家科技支撑计划2012BAD17B02、2012 BAD17B03;广东省自然科学基金S2013040014562

在线出版日期：2014-09-28（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：41-46