草鱼呼肠孤病毒vp5基因诱饵重组载体的构建、转化与自激活作用检测

摘要：

根据草鱼呼肠孤病毒( Grass Carp Reovirus,GCRV)的vp5基因设计特异性引物,并扩增其开放阅读框序列(open reading frame,ORF),然后连接至pGBKT7载体上构建酵母双杂交诱饵载体pGBKT7-vp5,转化至酵母菌Y2HGold,并进行PCR鉴定以及自激活性和毒性检测.PCR、酶切以及测序表明,pGBKT7-vp5重组诱饵载体构建成功.自激活性和毒性检测显示,阳性重组菌株pGBKT7-vp5/Y2HGold和阴性对照菌株pGBKT7/Y2HGold在SD/-Trp平板上出现大小相一致的乳白色菌落,且在SD/-Trp/X-α-Gel、SD/-Trp/AbA+/X-α -Gel平板上生长出蓝色菌落,而在SD/-Trp/-Ade/-His无菌落出现.表明重组菌株pGBKT7-vp5/Y2HGold表达的融合蛋白激活了报告基因AURl-C和MELI,没有激活报告基因ADE2和HIS3并且对宿主菌无毒性.该重组诱饵载体可用于酵母双杂交系统进一步筛选cDNA文库中与其相互作用的蛋白.

关键词：草鱼呼肠孤病毒、酵母双杂交系统、诱饵载体、自激活性

所属期刊栏目：32

分类号：S943.112.41;Q782(水产保护学)

资助基金：国家973计划2009CB118704

在线出版日期：2012-11-16（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：42-48