黑曲霉尿苷/尿嘧啶营养缺陷型转化系统的构建及应用

摘要：

黑曲霉(Aspergillus niger)是一种重要的工业发酵菌株,它具有强大的蛋白分泌表达能力.为了提高黑曲霉遗传操作效率及优化重组菌株的筛选策略,构建以尿苷/尿嘧啶营养缺陷型为筛选标记的转化系统.利用CRISPR/Cas9技术实现pyrG基因的敲除,在含有尿嘧啶核苷和5-氟乳清酸(5-FOA)的抗性培养基中筛选表型正确的转化子.经基因组PCR验证,黑曲霉营养缺陷型菌株可稳定遗传.利用该转化系统可成功实现增强型绿色荧光蛋白在黑曲霉中的表达.通过结合增强型绿色荧光蛋白和流式细胞仪建立了黑曲霉转化子的高通量筛选模型.

关键词：黑曲霉、CRISPR/Cas9、基因敲除、尿嘧啶营养缺陷型、增强型绿色荧光蛋白(EGFP)

所属期刊栏目：52

分类号：Q939.9(微生物学)

资助基金：国家自然科学基金;重庆市技术创新与应用发展专项重点项目

在线出版日期：2024-01-30（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：105-111