分泌型水蛭素Ⅱ基因工程菌的构建

摘要：

水蛭素(Hirudin,HV)是目前已知的最强有力的凝血酶天然抑制剂,对多种血栓性疾病有很好的预防和治疗作用.构建两种融合DsbA信号肽的分泌型水蛭素Ⅱ基因工程菌,一种分泌的是N端第一个氨基酸突变为Ala的突变型水蛭素Ⅱ(spHV2mut),而另一种分泌的是天然型水蛭素Ⅱ(spHV2).采用重叠延伸(SOE)技术对水蛭素ⅡN端第一个氨基酸的基因序列进行定点突变,分别将突变和未突变的水蛭素Ⅱ基因重组至DsbA信号肽的编码基因下游,经限制性内切酶Nde Ⅰ和BamH Ⅰ酶切后,重组于表达载体pET-39b(+),转化至E.coli BL21 (DE3),获得两种工程菌.分别经IPTG诱导表达和周质蛋白提取,再经阴离子交换层析纯化,得到两种重组水蛭素.通过凝血酶滴定法进行活性测定,比活性相同,突变型的表达量提高了近一倍,天然型水蛭素Ⅱ(spHV2)为500 ATU/mL,突变型水蛭素Ⅱ(spHV2mut)为900 ATU/mL.

关键词：水蛭素、分泌表达、突变体、活性测定

所属期刊栏目：42

分类号：Q789(基因工程（遗传工程）)

在线出版日期：2014-03-21（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：50-53