支原体污染通过耗竭L-精氨酸降低HEK-293细 胞中质粒DNA转染效率

摘要：

目的:明确支原体污染对HEK-293细胞质粒DNA转染效率的影响,并从支原体对细胞精氨酸代谢的角度探究其机制.创新点:支原体是细胞培养中的常见污染源.HEK-293是目前常用的生产蛋白、包装病毒的常用细胞系.然而,目前支原体污染对于质粒DNA转染效率的影响未见报道.本研究首次报道支原体污染对HEK-293细胞质粒DNA转染效率的影响,并揭示其机理.方法:采用4',6-二脒基-2-苯基吲哚(DAPI)和聚合酶链反应(PCR)方法鉴定HEK-293细胞中的支原体污染情况以及支原体抗生素Plasmocin对支原体污染的清除效果.通过聚乙烯亚胺(PEI)方法对支原体污染的HEK-293细胞及支原体清除后的HEK-293细胞转染质粒,比较转染效率差异.通过高效液相色谱法(HPLC)分析支原体污染的和支原体清除后的HEK-293细胞的细胞裂解产物和细胞上清中的L-精氨酸、瓜氨酸含量变化.在支原体污染的HEK-293细胞中补充L-精氨酸,观察质粒转染效率的改变情况.结论:支原体污染能大大降低HEK-293细胞中质粒DNA的转染效率,且其原因与支原体能耗竭细胞中的L-精氨酸有关.

关键词：支原体、质粒、转染效率、精氨酸、HEK-293细胞

所属期刊栏目：20

分类号：R735.7;R927.2;R3

在线出版日期：2019-12-05（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：1021-1026,0