捻转血矛线虫锌金属蛋白酶NAS-31的表达特性及功能初步研究

摘要：

捻转血矛线虫病由捻转血矛线虫(Haemonchus contortus)寄生于反刍动物皱胃之中引起.为探究捻转血矛线虫锌金属蛋白酶NAS-31基因(Hc-nas-31)在虫体自由生活时期(特别是3期幼虫)中发挥的功能,本研究通过实时荧光定量聚合酶链反应(real-time quantitative polymerase chain reaction,qRT-PCR)检测目的基因在捻转血矛线虫各发育阶段的转录水平,利用cDNA末端快速扩增(rapid amplification of cDNA ends,RACE)、基因步移及融合PCR方法扩增并分析其基因结构;构建原核表达载体后转化至BL21感受态细胞中进行诱导表达;将纯化后的蛋白免疫新西兰大白兔以制备多克隆抗体;通过虫体间接免疫荧光分析Hc-NAS-31在捻转血矛线虫体内的表达特性并预测其功能.结果表明:Hc-nas-31在各时期虫体中均有转录,其中在3期幼虫中的转录水平最高;蛋白质印迹结果显示,制备的抗体能特异性结合Hc-NAS-31天然蛋白;间接免疫荧光分析发现,Hc-NAS-31蛋白主要表达于3期幼虫的上皮细胞合胞体内,在成虫中则分布于肠道、生殖腺(性腺)、肌肉组织及早期虫卵中.本实验明确了NAS-31在捻转血矛线虫中的表达特性,为进一步研究Hc-nas-31的生物学功能奠定了基础.

关键词：捻转血矛线虫;捻转血矛线虫锌金属蛋白酶NAS-31基因;转录水平;表达特性

所属期刊栏目：47

分类号：S855.9(动物医学（兽医学）)

资助基金：国家重点研发计划;国家自然科学基金;浙江省基础公益计划;国家重点基础研究发展计划（973计划）

在线出版日期：2022-01-14（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共10页

页码：805-814